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  • 半定量RT-PCR与荧光定量Real-time PCR

    文/ 发布于2017-11-20 浏览次数:1176

      半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。以半定量RT-PCR为基础建立起来的mRNA含量测定技术,较含内标化的RT-PCR定量测定的mRNA的方法更为简便可行。

      这种方法不另设‘内标准',排除了俩对不同引物之间的相互抑制和灵敏读差异,而且具有明显的剂量-效益关系和良好的重复性。

      步骤:

      1.抽提RNA,2.反转录获得cDNA,3.以cDNA为模板做PCR

      注意:

      步骤1,RNA抽提质量一定要好,注意污染。内参的选择,常用的有βactin和GAPDH俩中。步骤3,半定量RT-PCR应该再两管中进行,既内参和目的基因各一管,这样便于控制,做图的时候可以放在一各泳道里跑!指数期和平台期一定要摸清楚!


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