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1、气相色谱(GC)和高效液相色谱法(HPLC) 气相色谱法主要是将大肠杆菌经过一系列衍生化的前处理后,为接下来的分析研究提供尽可能多的化学组分。大肠杆菌的污染程度可以用顶空气相色谱法来分析,其...
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反转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction RT-PCR)是一项有效的和广泛使用的研究工具,它可以用于多种应用,包括RNA检测、基因定量以及克隆。
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在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR 进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 。
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转移1 pg~100 ng的poly(A)+RNA或者10 pg~1
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cDNA产量的很低
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Abstract:迄今为止,已确定9禽流感病毒神经氨酸酶(NA)的亚型。为了能更迅速的区分禽流感病毒的NA,对其进行了RT-PCR。在分析了GenBank509个完整的NA序列的基础上,设计了九对NA RT-PCR的特异引物。设计的引物能扩增部分NA的基因,并且对于每一个NA的亚型(N1—N9)是独一无二的。
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RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。
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CR 为反转录PCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写。逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。
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基因表达的检测有几种方法。经典的方法(仍然重要)是根据在细胞或生物体中 所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。随着大分子分离技 术的进步使得特异的基因产物或蛋白分子的识别和分离成为可能。
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实时RT-PCR应用于明确要求定量数据分析的分子医学、生物工程、微生物学和诊断学定量测定mRNA所用的的方法。尽管他被描述成“黄金”标准,但他还远远未达到成为标准检测的程度。
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半定量RT-PCR与定量RT-PCR的区别是半定量RT-PCR操作简便,可快速推测样品中特异mRNA的相对数量;而定量RT-PCB可实时定量,较半定RT-PCB更准确。
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半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。