国产ELISA试剂盒检测细胞因子的优缺点

　　从21世纪初期，由于免疫学研究中一个非常活跃的领域就是细胞因子的研究，它的检测成为现代生物科学研究的重要方面。国内领先的生物厂家，运用抗原、抗体反应的原理已研制出了高灵敏度（sensitive）、高特异性、高度配套的细胞因子检测试剂盒，生产的检测试剂盒涵盖几乎所有的细胞因子。依据检测方法不同，可分为ELISA测定（酶联免疫）和放射免疫测定。

　　1. 放射免疫测定放射免疫测定是将同位素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合，方法大多采用竞争法原理。待检的细胞因子与放射性同位素标记的细胞因子竞争与细胞因子抗体（多克隆抗体或单克隆抗体）结合，再通过分离剂分离结合状态的标记物，计数后根据标准曲线即可计算出细胞因子的量。本法具有灵敏度高（可检测出ng甚至pg水平），特异性强、准确性好等特点。

2.ELISA测定

2-1.酶联免疫斑点（ELISPOT）

检测试剂盒是基于定量夹心ELISA法原理，将刺激后的细胞滴加到包被在贴PVDF微孔中，放置于37℃孵育。在孵育的过程中，细胞分泌的细胞因子即会被包被的抗体所捕获，以下的过程与一般的ELISA实验相同，最后用不溶性的酶联底物进行显色，每一个显色点（斑点）既代表一个分泌细胞因子的细胞。通过专用的ELISPOT分析仪或在显微镜下进行计数，就可以进行分析。ELISPOT法用于检测单个细胞分泌的细胞因子，综合了普通ELISA

方法的高特异性和准确定量的优点，而且具有生物活性分析得出与功能相关的结果的优点。

2-2.双抗夹心ELISA法

双抗体夹心法需制备针对细胞因子不同位点的两个单克隆抗体，一个抗体作为固相抗体用于包被，另一个作为标记抗体。可采用常规双抗夹心法，也可采用一步法。由于血清中细胞因子的含量很低。常规ELISA法不能满足要求，需引入生物素－亲合素系统来提高灵敏度，即加入样品后加入生物素标记的另一个抗体，再加入亲合素及生物素化的酶，再加入底物进行显色，颜色与待检的细胞因子量呈正比

三、试剂盒检测细胞因子的优缺点

A. 优点

1.特异性强，这是标记免疫技术的共同特点。

2.使用简便，省时。

3.重复性好，影响因素少，实验结果稳定。

B. 缺点

1.测定的是蛋白的含量而不是生物学活性。

2.检测的灵敏度不如生物学活性法。

3.由于各个实验室制备的抗体不同，同一样品用不同ELISA试剂盒检测的结果也不一样，实验室之间难以进行质量控制。