细胞因子检测是判断机体免疫功能的一个重要指标,因而具有重要的实验室研究价值,同时还可能在临床上有诸多实用价值、包括许多疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测等。但是,由于细胞因子在体内的含量甚微,给细胞因子的检测带来困维,要同时测定多种细胞因子对标本的要求更高,还需要复杂的仪器设备才能定量。目前细胞因子的主要检测方法包括:
(一)依赖性细胞株
一些肿瘤细胞株必须依赖于细胞因子方能在体外增殖,如DTLL细胞株依赖IL-2;FDC-PL细胞株依赖于小鼠IL-3;TF-1细胞株依赖于人IL-3和人GM-CSF,因而可利用这些依赖细胞株检测相应的细胞因子。这种方法敏感性高,特异性也不错,但可异的是并非所有细胞因都能找到相应的细胞株,因而限制了它的应用。
(二)功能检测
利用一些细胞因子的功能特性,可建立相应的活性测定方法,如干扰素的抑制病毒感染效应,肿瘤坏死因子对L929细胞的杀伤作用等。这样的方法敏感性高,但特异性不够,容易受一些扰因素的影响。
(三)免疫测定
利用抗原抗体反应的原理,制备出抗细胞因子的单克隆抗体或多克隆抗体,可进行细胞因子的免疫检测。这种方法的优点是特异性强、操作简便,缺点是灵敏度不够,且不能代表活性测定的结果。从目前的发展趋势来看,已研制出了高灵敏度、特异性高、高度配套的细胞检测ELISA试剂盒,其应用范围广阔,市场成熟。现已开发了多细胞因子检测ELISA试剂,可同时检测8-10种常见的细胞因子。
(四)酶联免疫斑点实验(ELISPOT)
是在包被有待测细胞因子抗体的微孔板上加入待测细胞样本,经刺激后分泌细胞因子,并被相应抗体捕获后显色,一个斑点代表一个细胞因子分泌细胞。具有灵敏度高,通量高,单细胞功能水平检测的优势。
(五)多聚酶链反应技术(PCR)
PCR(polymerase chain reation)技术是一种高效的基因体外扩增技术,目前PCR技术已用于细胞因子的检测中,首先将细胞因子产生细胞的RNA提取出来,再经逆转录合成cDNA,以cDNA为模板,在细胞因子引物的引导下,即可进行PCR扩增。这种技术是迄今最敏感的细胞因子检测技术,操作也较简便,缺点是测定结果只能代表细胞因子基因的是否有表达,并且不容易对细胞因子表达水平进行定量。
(六)细胞因子微球检测技术(CBA)
CBA(Cytometric Bead Array)是一种基于流式细胞仪上的多重蛋白定量检测方法,它能够同时对单个样品中的多个细胞因子指标进行检测,对样本量的要求更少,具有更高的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性。
CBA实验原理
(七)Luminex
Luminex又称“液相悬浮芯片分析系统”,是用不同配比的两种荧光染料将聚苯乙烯微球染成多达100种不同荧光编码的微球,把针对不同待测物的抗体分子或基因探针结合到特定的编码微球上,加入待测物或待测的扩增片段后与标记荧光素结合反应来检测荧光强度。可对微量10μl标本同时检测100个细胞因子指标,检测低限可达1pg/ml。
Luminex实验原理?
雷德生物是一家专注于免疫学研究的生物医学科技创新型企业,致力于免疫转化医学和临床领域,提供从科学研究到临床诊断的产品和服务,包括细胞因子检测试剂,原代免疫细胞,流式细胞仪,Luminex等技术服务和免疫性相关疾病的诊断试剂和仪器设备。