水质(粪)大肠菌群检验纸片检验原理:
按 MPN法,将一定量的乳糖、指示剂(溴甲酚紫和 2,3, 5-氯化三苯基四氮唑即 TTC)以及营养成分等吸附于一定面积的无菌滤纸上,在特定的温度(37℃ 或 44.5℃)培养24h,当细菌生长繁殖时,产酸使 PH值降低,溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色。同时,产气过程相应的脱氢酶在适宜的 PH值范围内,催化底物脱氢还原 TTC 形成红色的不溶性三苯甲臜(TTF),即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点(或红晕)。通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断,从而确定是否有总大肠菌群或粪大肠菌群存在,再通过查 MPN表 就可得出相应总大肠菌群或粪大肠菌群的浓度值。
使用方法:
1、接 种:每个样品按三个10倍递减的不同接种量接种,每个接种量分别接种5袋纸片,共接种15袋纸片。
清洁水样(选用产品编号为 060030 的纸片),接种水样总量为55.5mL, 10mL水样量纸片5袋,每袋接种水样10mL,1mL水样量纸片10张,其中5张各接种水样1mL,另5袋各接种 1:10的稀释水样1mL。
受污染水样(选用产品编号为 060070 的纸片),接种3个不同稀释度的1mL稀释水样各5袋。接种水样应均匀滴加在纸片上,纸片充分浸润、吸收水样,然后用手在塑膜袋外侧轻轻抚平,做好标记,袋口朝上竖直放置于恒温培养箱培养。
2、培养:检测总大肠菌群时,在36℃-38℃条件下培养18~24h后观察结果;检测粪大肠菌群时,在44.5±0.5℃的条件下培养18~24h 后观察结果
3、结果判读:
(1)纸片上出现红斑或红晕且周围变黄,为阳性。
(2)纸片全片变黄,无红斑或红晕,为阳性。
(3)纸片部分变黄,无红斑或红晕,为阴性。
(4)纸片的紫色背景上出现红斑或红晕,而周围不变黄,为阴性。
(5)纸片无变化,为阴性。
4、结果报告:根据不同接种量的阳性纸片数量,查相应的 MPN 表(见 HJ 755-2015 附录 B),按公式(1)换算并报告 1L
水样中总大肠菌群或粪大肠菌群数:
公式(1):C=100×M/Q
C-水样总大肠菌群或粪大肠菌群浓度(MPN/L)
M-查 MPN 表得到的 MPN 值(MPN/100mL)
Q-实际水样最大接种量(mL)
100-为 10×10mL,其中,10 将 MPN 值的单位 MPN/100mL 转换为 MPN/L,10mL 为 MPN 表中最大接种量。
5、结果表示:测定结果保留二位有效数字,大于等于 100 时以科学计数法表示,结果的单位为 MPN/L。平均值以几何平均计算。
质量控制:
1,理化指标:加水后,纸片 pH 值 7.0-7.3。
2,本品接种下列菌株,置于温箱中培养 18-24h,结果如下: