薄层层析中显色剂的选择与配制

　　TLC 显色试剂的选择

　　显色试剂 显色剂可以分成两大类：一类是检查一般有机化合物的通用显色剂;另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。显色剂种类繁多，列举一些常用的显色剂。

　　l.通用显色剂

　　硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液;硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液;1.5mol/L硫酸溶液与0.5-1.5mol/L硫酸铵溶液，喷后110oC烤15min，不同有机化合物显不同颜色。

　　0.5%碘的氯仿溶液 对很多化合物显黄棕色。

　　中性0.05%高锰酸钾溶液 易还原性化合物在淡红背景上显黄色。

　　碱性高锰酸钾试剂 还原性化合物在淡红色背景上显黄色。 溶液I：1%高锰酸钾溶液;溶液Ⅱ：5%碳酸钠溶液;溶液I和溶液Ⅱ等量混合应用。

　　酸性高锰酸钾试剂 喷1.6%高锰酸钾浓硫酸溶液(溶解时注意防止爆炸)，喷后薄层于180oC加热15～20min。

　　酸性重铬酸钾试剂 喷5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150oC烤薄层。

　　5%磷钼酸乙醇溶液 喷后120℃烘烤，还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。

　　⑧铁氰化钾-三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色，再喷2mol/L盐酸溶液，则蓝色加深。 溶液I：1%铁氰化钾溶液;溶液Ⅱ：2%三氯化铁溶液;临用前将溶液I和溶液Ⅱ等量混合。

　　2.专属性显色剂 由于化合物种 类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下：

　　(1) 烃类

　　①硝酸银/过氧化氢 检出物：卤代烃类。 溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再加30%过氧化氢1滴。 方法：喷后置未过滤的紫外光下照射; 结果：斑点呈暗黑色。

　　②荧光素/溴 检出物：不饱和烃。 溶液：I.荧光素0.1g溶于乙醇lOOml;Ⅱ.5%溴的四氯化碳溶液。 方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。

　　③四氯邻苯二甲酸酐 检出物：芳香烃。 溶液：2%四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯(10：1)的溶液。 方法：喷后置紫外光下观察。

　　④甲醛/硫酸 检出物：多环芳烃。 溶液：37%甲醛溶液O.2ml溶于浓硫酸l0ml。

　　(2)醇类

　　3，5一二硝基苯酰氯 检出物：醇类。 溶液：I.2%本品甲苯溶液;Ⅱ.0.5%氢氧化钠溶液;Ⅲ.O.002%罗丹明溶液。 方法：先喷(I)，在空气中干燥过夜，用蒸气薰2min，将纸或薄层通过试液(Ⅱ)30s，喷水洗，趁湿通过(Ⅲ)15s，空气干燥，紫外灯下观察。

　　硝酸铈铵 检出物：醇类。 溶液：I.1%硝酸铈铵的0.2mol/L硝酸溶液;Ⅱ.N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐1.5g溶于甲醇、水与乙酸(128m1+25m1+1.5m1)混合液中，用前将(I)与(Ⅱ)等量混合。喷板后于105oC加热5min。

　　③香草醛/硫酸 检出物：高级醇、酚、甾类及精油。 溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。 方法：喷后于120oC加热至呈色最深。 ④二苯基苦基偕肼 ’ 检出物：醇类、萜烯、羰基、酯与醚类。 溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。 方法：喷后于110oC加热5～lOmin。 结果：紫色背景呈黄色斑点。

　　(3)醛酮类

　　品红/亚硫酸 检出物：醛基化合物。 溶液：I.0.01%品红溶液，通入二氧化硫直至无色;Ⅱ.0.05mol/L氯化汞溶液; Ⅲ.O.05mol/L硫酸溶液。 方法：将I、Ⅱ、Ⅲ以1：1：10混合，用水稀释至l00ml。

　　邻联茴香胺 检出物：醛类、酮类。 溶液：本品乙酸饱和溶液。

　　2，4-二硝基苯肼 检出物：醛基、酮基及酮糖。 溶液：I.0.4%本品的2mol/L盐酸溶液; Ⅱ.本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加浓盐酸lml。 方法：喷溶液I或Ⅱ后，立即喷铁氰化钾的2mol/L盐酸溶液。 结果：饱和酮立即呈蓝色;饱和醛反应慢，呈橄榄绿色;不饱和羰基化合物不显色。

　　绕丹宁 检出物：类胡萝卜素醛类。 溶液：I.1%～5%绕丹宁乙醇溶液;Ⅱ.25%氢氧化铵或27%氢氧化钠溶液。 方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，干燥。

　　(4)有机酸类

　　1 溴甲酚绿 检出物：有机酸类。 溶液：溴甲酚绿0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml。 方法：浸板。 结果：蓝色背景产生黄色斑点。

　　2 高锰酸钾/硫酸 检出物：脂肪酸衍生物。 溶液：见通用显色剂酸性高锰酸钾。

　　3 过氧化氢 检出物：芳香酸。 溶液：0.3%过氧化氢溶液。 方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。 结果：呈强蓝色荧光。

　　4 2，5 6-二氯苯酚-靛酚钠 检出物：有机酸与酮酸。 溶液：0.1%本品的乙醇溶液。 方法：喷后微温。 结果：蓝色背景呈红色。

　　(5)酚类

　　1 Emerson 试剂(4-氨基安替比林/铁氰化钾(Ⅲ)) 检出物：酚类、芳香胺类及挥发油。 溶液：I.4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml;Ⅱ.铁氰化钾(Ⅲ)4g溶于水50ml，2 用乙醇稀释至100ml。 方法：先喷溶液I，3 在热空气中干燥5min，4 再喷溶液Ⅱ，5 再于热空气中干燥5min，6 然后将板置含有氨蒸气(25%氨溶液)的密闭容器中。 结果：斑点呈橙-淡红色。挥发油在亮黄色背景下呈红色斑点。

　　7 Boute 反应 检出物：酚类、氯、溴、烷基代酚。 方法：将薄层置有NO2蒸气(含浓硝酸)的容器中3～10min，8 再用NH2蒸气(浓氨液)处理。

　　9 氯醌(四氯代对苯醌) 检出物：酚类。 溶液：1%本品的甲苯溶液。

　　10 DDQ(二氯二氰基苯醌)试剂 检出物：酚类。 溶液：2%本品的甲苯溶液。

　　11 TCNE (四氰基乙烯)试剂 检出物：酚类、芳香碳氢化物、杂环类、芳香胺类。 溶液：0.5%～1%本品的甲苯溶液。

　　12 Gibb’s(2，13 6-二溴苯醌氯亚胺)试剂 检出物：酚类。 溶液：2%本品的甲醇溶液。 ⑦氯化铁 检出物：酚类、羟酰胺酸。 溶液：1%～5%氯化铁的0.5mol/L盐酸溶液。 结果：酚类呈蓝色、羟酰胺酸呈红色。

　　(6)含氮化合物

　　①FCNP(硝普钠/铁氰化物)试剂 检出物：脂 肪族含氮化物，如氨基氰、胍、脲与硫脲及其衍生物，肌酸及肌酐。 溶液：10%氢氧化钠溶液、10%硝普钠溶液、10%铁氰化钾溶液与水按1：1：1：3混合，在室温至少放置20min，冰箱保存数周，用前将混合液与丙酮等体积混合。

　　②Dragendorff(碘化铋钾试剂)试剂 检出物：芳香族含氮化合物，如生物碱类、抗心律不齐药物。 溶液：I.碱式硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中;Ⅱ.碘化钾8g溶于水20ml中。 将上述溶液I及Ⅱ等量混合，置棕色瓶中作为储备液，用前取储备液lml、冰醋酸2ml与水l0ml混合。 结果：呈橘红色斑点。

　　4-甲基伞形酮 检出物：含氮杂环化合物。 溶液：本品0.02g溶于乙醇35ml，加水至100ml。 方法：喷板后置25%氨水蒸气的容器中,取出后于紫外灯(365nm)下观察。

　　碘铂酸钾 检出物：生物碱类及有机含氮化物。 溶液：10%六氯铂酸溶液3ml与水97ml混合，加6%碘化钾溶液，混匀。临用前配制。

　　硫酸高铈铵/硫酸 检出物：生物碱及含碘有机化物。 溶液：硫酸铈1g混悬于4ml水中，加三氯乙酸1g，煮沸，逐滴加入浓硫酸直至混浊消失。 方法：喷后薄层于110℃加热数分钟。 结果：阿朴吗啡、马钱子碱、秋水仙碱、罂粟碱、毒扁豆碱与有机碘化物均能检出⑥Ehrlich (对二甲氨基苯甲醛/盐酸)试剂 检出物：吲哚衍生物及胺类。 溶液：1%本品的浓盐酸溶液与甲醇1：1混合。 方法：喷后板于50℃加热20min。 结果：呈不同颜色的斑点。

　　(7)胺类

　　①硝酸/乙醇 检出物：脂肪族胺类。 溶液：50滴65%硝酸于乙醇100ml中。 方法：需要时120oC加热。

　　②2，6-二氯醌氯亚胺 检出物：抗氧剂、酰胺(辣椒素)、伯、仲脂肪胺、仲、叔芳香胺、芳香碳氢化物、药物、苯氧基乙酸除草剂等。 溶液：新鲜制备的0.5%～2%本品乙醇溶液。 方法：喷后薄层于110oC加热10min，再用氨蒸气处理。

　　③茜素 检出物：胺类。 溶液：O.1%本品的乙醇溶液。

　　④丁二酮单肟/氯化镍 检出物：胺类。 溶液：I.丁二酮单肟1.2g溶于热水35ml中，加氯化镍0.95g，冷却后加浓氨水2ml; Ⅱ.盐酸羟胺0.12g溶于200ml水中。 方法：将溶液I及Ⅱ混合，放置1天，过滤。

　　(5)Pauly (对氨基苯磺酸)试剂 检出物：酚类、胺类和能偶合的杂环化合物。 溶液：磺酸4.5g溶于温热的12mol/L盐酸45ml中，用水稀释至500ml，取lOml于冰中冷却，加4.5%亚硝酸钠冷溶液lOml，于OoC放置15min。用前加等体积10%碳酸钠溶液。

　　硫氰酸钴(Ⅱ). 检出物：生物碱、伯、仲、叔胺类。 溶液：硫氰酸铵3g与氯化钴1g溶于水20ml。 结果：白色至粉红色背景上呈蓝色斑点，2h后颜色消退。若将薄层喷水或放入饱和水蒸气容器内，可重现色点。

　　1，2-萘醌-4-磺酸钠 检出物：芳香胺类。 溶液：本品0.5g溶于95ml水，加乙酸5ml，滤去不溶物即得。 方法：喷后反应30min显色。

　　葡萄糖/磷酸 检出物：芳香胺类。 溶液：葡萄糖2g溶于85%磷酸l0ml与水40ml混合液中，再加乙醇与正丁醇各30ml。 方法：喷后于115℃加热l0min。

　　(8)硝基及亚硝基化合物

　　①α-萘胺 检出物：3，5一二硝基苯甲酸酯、二硝基苯甲酰胺。 溶液：I.O.5%α-萘胺乙醇溶液; Ⅱ.10%氢氧化钾甲醇溶液。 方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ。 结果：呈红褐色斑点。 ②二苯胺/氯化钯 检出物：亚硝胺类。 溶液：1.5%二苯胺乙醇溶液与0.1g氯化钯的0.2%氯化钠溶液lOOml，按5：1混合。 方法: 喷后置紫外光(254nm)下观察。 结果：显紫色斑点。

　　(9)氨基酸及肽类

　　①茚三酮 检出物：氨基酸、胺与氨基糖类。 溶液：本品O.2g溶于乙醇l00ml中。 方法：喷后于110oC加热。 结果：呈红紫色斑点。

　　②茚三酮/乙酸镉 检出物：氨基酸及杂环胺类。 溶液：茚三酮1g及乙酸镉2.5g溶于l0ml冰醋酸中，用乙醇稀释至500ml。 方法：喷后于120oC加热20min。

　　③1，2-萘醌-4-磺酸钠 检出物：氨基酸。 溶液：临用前将本品O.02g溶于5%碳酸钠l00ml中。 方法：喷后室温干燥。 结果：不同氨基酸呈不同色点。

　　④靛红/乙酸锌 检出物：氨基酸与某些肽类。 溶液：靛红1g与乙酸锌1g溶于95%异丙醇l00ml中，加热至80oC，冷却后加乙酸1ml，冰箱保存。 方法：喷后于80～85"C加热30min。

　　⑤茚三酮/冰醋酸 检出物：二肽及三肽。 溶液：1%茚三酮吡啶溶液与冰醋酸按5：1混合。 方法：喷后于l00oC加热5min。

　　⑥香草醛 检出物：氨基酸及胺类。 溶液：I.本品1g溶于丙醇50ml中; Ⅱ.1mol/L氢氧化钾溶液lml，用乙醇稀释至lOOml。 方法：先喷溶液I后于110oC干燥l0min，再喷溶液Ⅱ，于110oC再干燥l0min，于紫外光(365nm)下观察。

　　(10)甾类

　　①香草醛/硫酸 检出物：甾体激素。 溶液：1%香草醛浓硫酸溶液。 方法：喷后于105℃加热5min。

　　②氯化锰 检出物：雌激素类。 溶液：氯化锰0.2g溶于含硫酸2ml的甲醇60ml中。 方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。

　　③高氯酸 检出物：甾体激素。 溶液：5%高氯酸甲醇溶液。 方法：喷后于110oC加热5min，置紫外光(365nm)下观察。

　　④三氯化锑/乙酸 检出物：甾类与二萜类。 溶液：三氯化锑20g溶于乙酸20ml与氯仿60ml混合液中。 方法：喷后于100oC加热5min，紫外光长波下观察。 结果：二萜类斑点呈红黄-蓝紫色。

　　⑤对甲苯磺酸 检出物：甾族化合物、黄酮类与儿茶酸类。 溶液：20%本品的氯仿溶液。 方法：喷后于100oC加热数分钟，紫外光长波下观察。 结果：斑点呈荧光。

　　⑥氯磺酸/乙酸 检出物：三萜、甾醇与甾族化合物。 溶液：氯磺酸5ml在冷却下加乙酸l0ml溶解。 方法：喷后于130℃加热5～l0min，置紫外光长波下观察。 结果;斑点显荧光。

　　(11)糖类

　　①茴香胺、邻苯二酸试剂 检出物：碳氢化合物。 溶液：1.23g茴香胺及1.66g邻苯二酸于l00ml 95%乙醇中的溶液。 方法：喷雾或浸渍。 结果：己糖呈绿色、甲基戊糖呈黄绿色、戊糖呈紫色、糖醛酸呈棕色。

　　②四乙酸铅/2，7一二氯荧光素 检出物：甙类、酚类、糖酸类 溶液：I.2%四乙酸铅的冰醋酸溶液;Ⅱ.1%2，7一二氯荧光素乙醇溶液。 取溶液I、Ⅱ 各5ml混匀，用干燥的苯或甲苯稀释至200ml，试剂溶液只能稳定2h。 方法：浸板。

　　③邻氨基联苯/磷酸 检出物：糖类。 溶液：O.3g邻氨基联苯加85%磷酸5ml与乙醇95ml。 方法：喷板后llOoC加热15～20min。 结果：斑点呈褐色。

　　④苯胺/二苯胺/磷酸 检出物：还原糖。 溶液：4g二苯胺、4ml苯胺与20ml 85%磷酸共溶于200ml丙酮中。 方法：喷后于85℃加热l0min。 结果：产生各种颜色。1，4-己醛糖、低聚糖呈蓝色。

　　⑤双甲酮/磷酸 检出物：酮糖。 溶液：双甲酮(5，5-二甲基环己烷-1，3-二酮)10.3g溶于90ml乙醇与l0ml 85%磷酸中。 方法：喷板后于110oC加热15～20min。 结果：日光下观察，白色背景上呈黄色斑点，紫外光长波下呈蓝色荧光。

　　⑥联苯胺/三氯乙酸 检出物：糖类。 溶液：0.5g联苯胺溶于l0ml乙酸，再加10ml40%三氯乙酸水溶液，用乙醇稀释至l00ml。 方法：喷后置紫外光下照射15min。 结果：斑点呈灰棕-红褐色。

　　⑦对二甲氨基苯甲醛/乙酰丙酮 检出物：氨基糖类。 溶液：I. 5ml 50%氢氧化钾溶液与20ml乙醇混匀，取此溶液0.5ml，加乙酰丙酮0.5ml与正丁醇50ml的混合液l0ml，此两种溶液均需新鲜配制，临用前混合; Ⅱ. 1g对二甲氨基苯甲醛溶于30ml乙醇中，再加30ml浓盐酸，需要时此溶液可用正丁醇180ml稀释。 方法：先喷I后于105oC加热5min，再喷Ⅱ，然后于90℃干燥5min。 结果：斑点呈红色