贯叶连翘(Hypericumperforatum L．)是一种重要的植物药物。大量临床前和临床研究证实，贯叶连翘提取物具有抗肿瘤、抗病毒、抗抑郁等多种功效。其主要活性成分金丝桃素对多种肿瘤细胞具有光动力学毒性，还对高致病性禽流感病毒H5N1和H9N2等具有良好的杀灭作用。国际市场上通常以金丝桃素的含量作为贯叶连翘提取物质量标准。
我国贯叶连翘资源十分丰富，但目前贯叶连翘提取物中的有效成分含量较低。研究改进金丝桃素提取和纯化的方法，提高金丝桃素的含量，有利于充分利用贯叶连翘资源。
本课题尝试多种方法提取和纯化金丝桃素，并研究确立了金丝桃素和伪金丝桃素的定性和定量检测方法以及贯叶连翘HPLC指纹图谱，主要成果如下：
1．采用硅胶薄层层析确立了金丝桃素和伪金丝桃素的定性检测方法：固定相为硅胶GF254高效预制板或硅胶G预制板，流动相为氯仿：甲醇=8:2(加入5μL冰醋酸)。采用HPLC确立了金丝桃素和伪金丝桃素的定量检测方法：流动相为甲醇-0.006 moI/L NaHPO(HPO调pH6.5)=87.5:12.5，检测波长为590 nm，柱温为30℃，流速为1.0 mL/min。方法学研究表明，金丝桃素和伪金丝桃素的线性范围分别为0.0475～0.2357μg和0.0952～0.476 μg，精密度、重复性、稳定性和加样回收结果良好。
2．探讨了超声提取法在金丝桃素提取中应用的可行性，并确定了其最优提取参数。采用40 MHz、60 W的超声清洗仪处理贯叶连翘原药材，最优条件为：100％的甲醇作为溶剂，一次性连续超声30 min，液固比为200:1。得到的提取物中金丝桃素的含量为0.13％，与所检测的市售浸膏中的金丝桃素含量相当。
3．实验证明大孔吸附树脂在中药贯叶连翘有效成分金丝桃素纯化中应用的可行性。在所研究的三种大孔吸附树脂中以DA-201对金丝桃素的吸附力最强。通过优化得到的最适条件为：上样浓度、上样流速和上样体积分别为0.01662 mg/mL、1.5 mL/min和90 mL；对应的洗脱溶剂、洗脱流速和洗脱液体积分别为丙酮、1.5 mL/min和40 mL。
4．采用200～300目柱层析硅胶对金丝桃素进行纯化，以氯仿-甲醇进行梯度洗脱，所得产品中以2中金丝桃素的纯度最高，达到1.27％。采用葡聚糖凝胶LH-20对上述2进行进一步分离，得到金丝桃素的纯度可达2.35％。
5．采用梯度洗脱和变波长检测的方法，通过研究不同来源的15种贯叶连翘原药材，建立的贯叶连翘HPLC指纹图谱。标定了25个共有峰，各批药材的非共有峰面积比均小于10％。该法的稳定性、精密度以及重现性均符合指纹图谱的要求。
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