解析薄层色谱仪的原理

　　薄层扫描仪是可以对斑点进行扫描的专用分光光度计，用可见光或紫外光作光源，线性扫描或锯齿扫描薄层板展开后的斑点，该斑点就吸收该组分特征波长的单色光，剩余的单色光经透射或反射或发射荧光，由检测器积分起来，获得这块斑点面积的待测物质含量。

　　原理

　　薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固—液吸附色谱。它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品(几到几微克，甚至0.01微克)的分离;另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。

　　薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固-液吸附色谱。是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。一方面适用于小量样品(几到几十微克，甚至0.01μg)的分离;另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。因此又可用来精制样品。故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物资。此外，在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。

　　薄层色谱是在被洗涤干净的玻板(10×3cm左右)上均匀的涂一层吸附剂或支持剂，带干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色。

　　薄层色谱仪包括：薄层层板点样器、手动涂布台、干燥储备箱、洗板架、紫外光探测器。可以快速分离脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质。

　　类别

　　1.离心薄层色谱仪 2.棒状薄层色谱仪 3.手动薄层色谱仪 4.双波长薄层色谱扫描仪 5.全自动薄层色谱仪 6.旋转薄层色谱仪 7.全波长薄层色谱仪 8.全能型薄层色谱仪 9.二极管阵列薄层色谱扫描仪 10.加压薄层色谱仪 11.暗箱式薄层色谱摄影仪

　　用途

　　适用于化学、化工、医药、临床、农业、食品、毒理等领域内的各种化合物的分离、精制、定性鉴别、杂质检查和含量测定。

　　操作方法

　　(1) 薄层板制备 除另有规定外,将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合,

　　去除表面的气泡后，倒入涂布器中,在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2～

　　0.3mm)，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置

　　有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视)。

　　(2) 点样 除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底

　　边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为

　　宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。

　　(3) 展开 展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，并在壁

　　上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡或

　　按正文规定操作。

　　将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5

　　～1.0cm(切勿将样点浸入展开剂中),密封缸盖,待展开至规定距离(一般为10～15cm),

　　取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。

　　(4) 如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描

　　定量，则可用薄层扫描法。

　　薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，

　　结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果

　　的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与

　　对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，

　　只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。

　　洗脱后测定法

　　薄层经展开后用刮刀或捕集器将斑点的吸附剂捕集后，再用适当有机溶剂洗脱，然后用可见、紫外分光光度法、荧光分光光度法测定含量。

　　但样品斑点不能喷显色剂，以免影响不测定，斑点位置的确定方法。

　　样品在紫外线下发射荧光的，可在紫外灯下观察斑点并用针划去斑点位置。

　　用碘蒸汽显色，在组分处理出棕色斑点(碘吸附后会挥发)。

　　用标准物对照，将标准点于边上一测显色时，盖住样品，定出斑点位置。