目前大多数实验室在做细胞的转染时都是采用脂质体转染,用起来很方便,加入转染试剂即可。 但此种方法也有其局限性,比如转染效率不高、重复性不佳、转染试剂昂贵等。
电转化技术是一种比较新的方法。对活细胞而言,一定的电脉冲可诱导细胞产生跨膜电位,当外加电场场强大于细胞膜穿孔的临界场强时,导致细胞膜产生可逆的穿孔,使得大分子如DNA/RNA进入细胞。电转化方法具有重复性好、无试剂费用、转染效率高等优点。为什么电转化转染效率高呢?我们都知道,核酸是带负电荷的,在电场下,核酸分子会发生迁移,而不是静止的,也就是说核酸是主动进入细胞的,会大面积开花,这正是电转化方法效率高的一个重要原因。
当然,电转化方法也有其缺陷,就是细胞存活率的问题。有一些类型的细胞往往经不起高电压下电脉冲的折腾,很容易死亡。进行转化或转染实验时,增加电压,转染效率会高,但细胞存活率降低。解决之道就是可对电参数(电压、电阻、电容)进行优化,找到转染效率与存活率之间的平衡点。
我们实验室做转染、RNA干扰的人很多,转染试剂是一大笔开支,后来老板买了一台电转化仪,经过师兄的实验优化摸索之后,大多数人都改用电转了,效果比转染试剂好的多。另外,电转方法还有一个优势,配上活体电极,就可做活体了。