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  • His标签抗体做western需要考虑哪些

    文/ 发布于2017-11-20 浏览次数:1597

      His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的吸附纯化。由于分子量较小,并且较容易分离和纯化,His-tag 融合标签与其他标签相比有很多明显优势, 是目前用于纯化的融合标签中使用*为广泛的一种。His抗体可以用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位,以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等。然而,目前商品化

      His-tag的单克隆抗体(mAb)种类不多, 且价格也十分昂贵。

      如何选择合适的His标签抗体?

      我们在选择His抗体时,主要根据自己的需要,特别是实验应用上的需要。其中需要考虑的因素包括了,His抗体的应用检测类型、His抗体的克隆性及制备来源等。比如该His抗体是否能用于Western Bloting的检测?是否可以用于免疫荧光IF实验?我是否需要特异性更好的单克隆His标签抗体?我是否需要考虑下是选择小鼠来源的还是兔来源的His抗体?

      之前有使用SSS(一家著名品牌的His标签抗体,名称隐去)的His标签抗体,一开始还好,过了半年后,就发现产品质量不稳定,做IF实验不行了,后来试用了下Abbkine的,IF结果很漂亮,顺带还买了他们的DyLight荧光二抗 —— 广州南方医科大学一客户

      一般来说,应用类型越多,在使用过程中的选择余地就越大,而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。 另外,抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面,也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl His抗体(假如其WB检测的稀释比率是1:5,000,*终使用液相当于500ml),要比效价低的1ml的His抗体(假如WB检测的稀释比率是 1:200,*终使用液相当于2ml)性价比更高。因此在选择抗体的时候,不但需要考虑抗体的量,还需要考虑抗体的效价,即不同应用的建议稀释比率。

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