His标签抗体做western需要考虑哪些

　　His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的吸附纯化。由于分子量较小，并且较容易分离和纯化，His-tag 融合标签与其他标签相比有很多明显优势, 是目前用于纯化的融合标签中使用*为广泛的一种。His抗体可以用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等。然而，目前商品化

　　His-tag的单克隆抗体(mAb)种类不多, 且价格也十分昂贵。

　　如何选择合适的His标签抗体？

　　我们在选择His抗体时，主要根据自己的需要，特别是实验应用上的需要。其中需要考虑的因素包括了，His抗体的应用检测类型、His抗体的克隆性及制备来源等。比如该His抗体是否能用于Western Bloting的检测？是否可以用于免疫荧光IF实验？我是否需要特异性更好的单克隆His标签抗体？我是否需要考虑下是选择小鼠来源的还是兔来源的His抗体？

　　之前有使用SSS（一家著名品牌的His标签抗体，名称隐去）的His标签抗体，一开始还好，过了半年后，就发现产品质量不稳定，做IF实验不行了，后来试用了下Abbkine的，IF结果很漂亮，顺带还买了他们的DyLight荧光二抗 —— 广州南方医科大学一客户

　　一般来说，应用类型越多，在使用过程中的选择余地就越大，而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。 另外，抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl His抗体（假如其WB检测的稀释比率是1:5,000，*终使用液相当于500ml），要比效价低的1ml的His抗体（假如WB检测的稀释比率是 1:200，*终使用液相当于2ml）性价比更高。因此在选择抗体的时候，不但需要考虑抗体的量，还需要考虑抗体的效价，即不同应用的建议稀释比率。