电泳技术不同的电泳槽
一、电泳仪的组成电泳仪电源提供稳定的电压或电流电泳槽电极缓冲液和凝胶的容器梳子制胶板制备垂直或水平凝胶形成点样孔
二、电泳分离的原理电泳(electrophoresis)溶液中带电粒子(离子)在电场中移动的现象。
1、电荷效应利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的目的。
2、分子筛效应不同的分离介质形成的孔径不同,在孔径大的介质中泳动速度快,相反则慢。
3、待分离生物大分子的性质一般来说,分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳迁移速度越快。
4、电场强度电场强度(V/cm)是每厘米的电位降,也称电位梯度。电场强度越大,电泳速度越快。
三、电泳技术的种类按支持介质的不同可分为:⑴纸电泳(Paperelectrophorisis)⑵醋酸纤维薄膜电泳(CelluloseAcetateelectrophoresis)⑶琼脂凝胶电泳(AgarGelelectrophoresis)⑷聚丙烯酰胺凝胶电泳(PolyacrylamideGelelectrophoresis)(PAGE)⑸SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。
琼脂糖凝胶电泳对于双链DNA,电泳迁移率的大小主要与DNA分子大小有关。
不同浓度大小琼脂糖的有效分离范围琼脂糖浓度(%)DNA有效分离范围(Kb)0.50.71.01.21.530~112~0.810~0.57~0.43~0.2
AB1234567891011121314151617181920植物总DNA电泳检测A、B:λDNA(100ng、200ng)泳道1~20:植物样品RNA电泳检测质粒电泳检测质粒分子构象:线状、开环和超螺旋在琼脂糖凝胶中的迁移率:
Marker样品分子标记电泳质粒限制性内切酶鉴定
注意事项:
1、熔化琼脂糖时,宜低火,防暴沸;
2、倒胶时温度要低于60℃且速度要慢;
3、拔梳子和点样要小心,以免破坏胶孔;
4、电泳仪打开前应检查电压、电流旋纽是否处于零位置,工作电压一般为60-80V,400mA,电泳完毕应将电压、电流旋钮恢复到零位置;
5、防止EB污染和紫外灯伤眼。