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  • 垂直电泳槽使用方法

    文/ 发布于2018-12-25 浏览次数:564

      垂直电泳槽使用方法:

      一、垂直电泳槽组成部件

      (一)装有铂金丝的贮液槽一对,配有冷却装置及电泳缓冲液流出口。

      (二)凹型橡胶框,配有玻璃板,可分别制作厚度为lmm、

      1.5mm的凝胶板,操作时根据需要选择适当厚度的玻璃板及梳子配套使用。

      (三)样品孔模具(梳子)用于电泳加样。

      (四)固定贮液槽的螺丝杆及螺母4对,28D、30型为5对。

      (五)橡胶管五根。两根长的用于连接冷却水的出入口;中等长度的两根用于连接电极缓;中液的流出口;zui短的一根用于连接贮液槽间的冷却水。

      (六)导线1付。

      二、垂直电泳槽使用方法

      (一)垂直电泳槽清洗部件

      上述部件组装前要彻底清洗干净。尤其是玻璃板及凹形带槽橡胶框,必须用泡沫海绵沾少许肥皂粉或洗涤剂彻底清洗干净。清洗后的玻璃板应放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。

      (二)组装电泳槽

      A、

      1、将四只固定螺杆插进一只贮液框(半上槽)的相应孔洞中,然后将贮液框仰放在桌上。

      2、左手拿凹型槽橡胶模框,右手的拇指与中指握住玻璃板的两侧边缘插到橡胶模框内 (注意手指不能接触灌胶面的玻璃板)。

      3、将带有玻璃的橡胶模框子放在仰放的贮液槽框架上,其下缘必须对齐贮液槽框下缘。

      4、双手拿另一只贮液槽框与仰放在桌上的贮液槽框相合,并使橡胶框上的凸出线位于贮液槽有机玻璃框中央。

      5、装上四只螺母,拧紧螺丝。注意拧紧螺丝时用力应均匀,zui好用双手按斜角位置双双逐渐拧紧。

      6、将电泳槽垂直竖起,放在桌上,带短玻璃板的贮液槽称上槽(阴极端),带长玻璃板的贮液槽称为下槽(阳极端),在长玻璃板与橡胶框间有一缝隙。此缝隙可用已熔化的10%琼脂沿长玻璃板下端灌入,为防止留存气泡,可稍抬起一端即可赶去气泡。待琼脂完全凝固后才能灌胶。

      B、也可将槽垂直竖起,将带有玻璃的橡胶模框直接放入槽中,对称拧紧螺丝后,用琼脂封底边。

      (三)灌胶

      1、先灌分离胶,待凝固后再灌浓缩胶。灌胶前接通冷却水,夹紧连接上下贮液槽的两根橡胶管。

      2、用细头滴管吸取胶液,沿长、短玻璃板中间缝隙从一端加入胶液。为防止产生气泡,可稍拾起另一端(气泡往高处走),不断加入胶液。若单层胶(分离胶)则加胶量约距离短玻璃板上端0.3厘米处,轻轻加少许水,双手轻轻将梳子插入,待胶凝后就可形成凹形加样孔。

      3、为防止漏胶,在上、下贮液槽中立即加入蒸馏水,但蒸馏水不能超过短玻璃板上缘。

      4、胶凝固后即可看到样品槽梳子与凝胶板间有一层折

      射率不同的亮区。

      (四)加样

      1、松开连接上、下贮液槽两根橡皮管上的夹子,放掉槽内的蒸馏水,待水流完后,再夹紧夹子。

      2、双手轻轻取出样品梳子,即可看到界线清楚的加样孔,将孔中水分吸去(注意千万不要碰坏孔沿的字面)。

      3、在上、下贮液槽中加入缓;中液,液体高度应超过上贮液槽短玻璃板上缘。

      4、用微量注射器吸取一定量的样品加到长、短玻璃板间的凹型凝胶样品孔内(注意加样动作要轻,针头不能碰坏胶面)。

      (五)电泳

      一贮液槽导线与电泳仪的负极相连,下贮液槽导线与电泳仪的正极相连。检查线路无误,方可按照所要求的电压电流进行电泳。

      (六)取出胶板

      电泳结束,旋松螺母,取出胶框,剥出玻璃板,在两块玻璃板下角空隙内,用刀片背面轻轻撬动,即可将胶面与一块玻璃板分开,将有胶板的玻璃板平放在桌上,双手轻轻沿凝胶底将胶片托起,放在大培养皿中染色,胶板经漂洗、脱色后即可看到清晰的分离条带。

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