液相色谱柱填装注意事项、使用及正确保存方式

　　液相色谱柱的正确保存是延长色谱柱使用寿命的重要一环，液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键。接下来小编就来为大家说说液相色谱柱填装注意事项、使用及正确保存方式。

　　液相色谱柱填装注意事项 

　　①高压操作的安全问题。常发生的问题是柱子与匀浆罐连接不牢，造成加压时柱头被高压冲下或柱子从匀浆罐上滑脱。此时，轻则填装失败，材料损失，重则造成人身伤害事故，一定要加以防范。除每次填装前均须仔细确认是否连接正确且牢靠外，zui好还可加上由法兰盘和长螺杆组成的预防脱落装置，以防万一。

　　②通常，先填装的柱床较后填装的柱床紧密。因此，当使用时宜以相反的方向为宜，即让近匀浆罐一端作为使用时流动相的出口，而填装时的出口端则作为流动相的入口。

　　③新柱子使用前应以甲醇冲洗20-30min,后，再改用流动相平衡。

　　④新柱子宜选适宜的标准样品进行评价并记录，以备存查和比较。

　　液相色谱柱的使用

　　色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。

　　1、样品的前处理：

　　a、最好使用流动相溶解样品。

　　b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。

　　c、使用0、45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。

　　2、流动相的配制：

　　液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：

　　a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。

　　b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。

　　c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果;同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。

　　d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

　　f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。

　　3、流动相流速的选择：

　　因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4、6mm的色谱柱，流速一般选择1ml/min，对于内径为4、0mm柱，流速0、8ml/min为佳。

　　当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。

　　注意：

　　a、由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。

　　b、对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。

　　c、含水流动相最在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要隔夜。最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。

　　d、流动相要求使用0、45μm滤膜过滤，除去微粒杂质。

　　e、使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。

　　4、柱性能测试：

启动液相色谱仪：

a、流动相流速设定为1ml/min。

　　b、UV检测器波长设定为254nm。

　　使用出厂测试时使用的流动相组成及测试样品。

　　记录并计算测试结果。

　　液相色谱柱的正确保存方式

　　1、短期保存色谱柱

　　反相色谱柱每天实验后的保养：

　　使用缓冲液（酸/碱）或含缓冲盐的流动相，实验完成后应用20-30柱体积的甲醇或乙腈和水的10：90混合物进行冲洗除盐，再保存在较高比例有机相或纯有机相中。如需过夜冲洗，可将流速保持在低流速下冲洗，如0、2ml/min流速。针对冲洗的目的，除无机盐用高比例水相，除强保留物质用高比例水相或者异丙醇。这里需要注意的是，一般针对反相柱子的过夜冲洗是为了清洗强保留物质，也就是高比例有机相使用的更多。需要特别注意的是在使用异丙醇的时候需要注意柱压，尽量降低流速。另外还有一个注意的是不要用纯水冲洗普通反相柱子，即便是AQ柱，在冲洗的时候应该在水中加入10%的有机相，防止将填料冲塌陷，影响色谱柱寿命。

　　其他色谱柱的短期放置，同样应先用和柱子匹配的中性溶剂冲洗好色谱柱，再把色谱柱的两头用密封堵头密封好即可，防止填料干涸。

　　2、长期保存色谱柱

　　如色谱柱暂时不用，需要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷或者Hex：IPA=90：10中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。特殊类型色谱柱的储存，需参考色谱柱说明书，使用厂商推荐的溶剂。

　　  这里特别提一下氨基柱，由于氨基色谱柱的特殊性，如果条件允许，在存放一段时间后，取出再冲洗过渡一下，可以帮助延长柱寿命。

　　液相色谱柱特别是高效液相色谱柱填装，是需要有较高的技巧和熟练的技能的，所以掌握一些基本的规律和方法是非常重要的。保护色谱柱的最佳方式是遵照色谱柱说明书的使用范围来使用色谱柱，避免超限或者临界使用。