应该如何避免在PCR实验中管子变型？

　　首先，倒置管子变性的罪魁祸首是PCR仪的热盖，热盖的作用是为了防止PCR反应过程中反应液的蒸发，水汽在管盖上凝结。

　　早期的PCR仪没有热盖，PCR加热过程中反应液蒸发形成水汽在管盖上凝结，导致PCR反应体系随着循环的进行不断减少，影响PCR反应的正常进行。为了防止PCR反应液的蒸发，会在配置好的PCR反应液中加入石蜡油或矿物油。但是反应结束以后，石蜡油不好清除赶干净，对接下来的步骤有所影响。

　　后来出现了带热盖的PCR仪，热盖的作用并不是防止蒸发，而是防止蒸发的水汽在管上凝结。因为管盖顶部有热源加热使管体内的蒸汽形成循环，所以反应液蒸发后的水汽不会在管盖上凝结。

　　市面上大家目前接触比较多的是可调式热盖，即热盖的高度可以手动调节，适用于各种PCR管，如高管和矮管。但是高度调节的压力是通过使用者来感觉的。

　　没压严实，导致热盖未发挥功能，反应体系减少，压得过头了，压力导致管体型变。

　　后来有了力矩式可调热盖

　　即热盖旋转到一定力矩后内置机构打滑，从而既保证了热盖压力，又防止了过度导致的变型。

　　但是还是需要注意的是，这类热盖使用结束后需要拧松热盖，否则下一个用户如果直接下压热盖，可能造成PCR管变型。

　　很多使用者会忘记松热盖。所以日常操作中不论是操作配置什么热盖的仪器，我们要养成习惯，除了使用后拧松热盖再取样本，同时在使用PCR仪器前习惯性地拧松热盖，预防上一位操作者未松热盖。

　　实际工作中，按照了以上良好的习惯去操作，为何还会出现管子变型的问题？？？

　　答 案

　　使用孔太少，压力不均导致的。以96孔为例，实验中，如果使用了16个以上的模块孔（具体的操作因人而异，同时也和放置的位置有关），实验的管子不会变型。

　　如果只用几个模块孔，反应稀少的几个样本管，而且放在模块中央或者中央偏一点的位置，就很容易发生管子变型的情况。解决这一问题的办法其实也很好办。

　　如果这一批实验需要用到的模块孔很少，只有几个，那可以在模块孔最边缘的四个角分别放4个空管（加不加水随意，目的只是为了平衡热盖下压的压力）。这样就可以解决扩增少量样本出现的管子变型的情况。

　　以上是对PCR实验中经常遇到的管子融化、变型问题的探讨，希望对您有帮助。