Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统,广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由 8个亲水氨基酸(DYKDDDDK)组成的多肽片断。Flag标签只有8个氨基酸组成,因此它不会占据其他表位与结合域,避免导致融合蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点,Flag标签倾向于定位在融合蛋白表面,因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。
如何选择合适的Flag标签抗体?
我们在选择Flag抗体时,主要根据自己的需要,特别是实验应用上的需要。另外,一个抗体检测后的应用类型越多,在使用过程中的选择余地就越大;而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。
另外,抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面,也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl Flag抗体(假如其WB检测的稀释比率是1:5000,最终使用液相当于500ml),要比效价低的1ml的Flag抗体(假如WB检测的稀释比率是1:200,最终使用液相当于200ml)性价比更高。
Abbkine的Flag标签抗体的效价有点超出意料。做WB实验时,第一次按照说明书推荐的1:1000,显示的条带很强,后来不断的稀释摸索条件,1:10000稀释的时候做WB条带仍然是很不错的。
为什么推荐Abbkine品牌的Flag抗体?
Flag系统是Sigma-Aldrich?拥有的系统,因此Sigma的Flag标签抗体是之前诸多客户的选择。Sigma的Flag标签抗体主要有M1和M2两种克隆号的抗体,其中M1克隆号的Flag抗体可用于检测Flag标签位于N末端的重组蛋白,而M2克隆号的Flag单克隆抗体则可以检测几乎所有的Flag标签蛋白。其2010年的中国报价分别为¥4649/200μg和¥3683/200μg。
假如您想选择一款性价比更高的Flag标签抗体,那Abbkine可能是另一个优先选择,其价格比Sigma要低30%左右。Abbkine的Flag标签抗体Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody(货号#A02010)可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位,以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白(包括N末端、C末端)等。该Flag抗体为小鼠源单克隆抗体,其免疫原为KLH偶联的Flag标签(DYKDDDDK)多肽。另外,Abbkine还同时提供经HRP偶联的Flag标签抗体,尤其适合IP-WB验证时去除二抗的干扰;兔源多克隆Flag抗体也为客户提供另一种Flag标签的检测方案。