Western Blot为何标记二抗而不是一抗？

　　如果一抗上直接加标记，不但不能保证抗体抗原反映的特异性，也不能保证实验的可重复性。

　　首先，由于抗体都是人工去设计的，对于一个人工设计的蛋白质来说，你可以设计一个很好的抗体与他结合；然而对于天然蛋白质，你不能保证一个很高的识别率和准确度。所以，针对1抗，我们可以设计出完美的2抗，然而针对原蛋白质，你无法设计一个特别完美的1抗。所以，直接标记1抗的出来的结果是不准确的，而标记2抗是相对于1抗直接标记来说更准确的，所以经过大量的实验之后人们抛弃了直接标1抗的方法。当然，标2抗也不是完全完美的，当然你也可以标3抗，4抗，不过那个成本就指数上升了，在保证一定的置信度的情况下，人们一般标到2抗就够了。

　　其次，对于同一个抗原，不同来源的1抗所识别的位置可能会有很大差异。这样，你就无法保证试验的可重复性。而1抗作为抗原来讲，可以将它的抗原决定簇设计的一样，这样针对不同的1抗，2抗是可以保证差不多一个样子的。而且这也给节约成本和方便标记带来了方便。

　　所以一般现在都是2步标记，第一个原因是主要的，第二个原因是次要的。