免疫组化一抗、二抗的选择

　　抗原抗体反应是抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。在这种反应中少不了“一抗”和“二抗”。

　　第一抗体就是能和非抗体性抗原（特异性抗原）特异性结合的蛋白。第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。

　　一抗的选择

　　对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，目的是避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应。例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。

　　二抗的选择

　　检测任何靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求。

　　1、种属来源要匹配

　　从一抗角度来看，二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源。

　　2、抗体同种型和亚型

　　二抗需与一抗的类别或亚类相匹配，这也一般是针对单克隆抗体而言的，而对于多克隆抗体而言，主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。例如：一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM；单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者也可以选择专门针对这一亚类的二抗。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG

　　3、特异性要求

　　为减少二抗与样本的非特异性结合，如果样本是人源的蛋白，一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗就需要选择抗小鼠源的二抗。对于要求比较高的，可以选择经过人血清吸附过的抗小鼠源的二抗，比较有效的排除了与人源组织（如IgG等）可能发生非特异性反应的IgG。

　　4、稀释比例

　　重新选择稀释比例。一般市场上提供稀释比例从1：10稀释度始，作5倍比稀释。