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  • 样品采集、冻存的寄送指南

    文/ 发布于2017-07-12 浏览次数:2017

      寄送标准

      1、寄送温度

      a) 胶条样品:冰袋环境;

      b) 组织、菌体、细胞沉淀、血清、培养基上清和蛋白提取液:样品收集后立即置于液氮中冷冻5min,-80℃保存,所有样品收集后干冰环境寄送;

      c) 细胞:冻存细胞干冰寄送;培养中的细胞需保证状态良好,培养瓶中装满培养基,常温寄送。

      2、寄送样品时附上填写完整的纸质版样品信息单(务必包含样品物种拉丁名及数据库、样品标识名称,管数,分组对比信息)。

      3、样品标记清晰明确,与样品信息单中保持一致,不同项目的样品量参考如下所述。

      蛋白混合物鉴定

      1、优先考虑客户提供考马斯亮蓝染色有明显条带的胶条样品,如银染样品则不能用戊二醛染色。建议上样量为20ng~2μg,保证全部蛋白都跑进分离胶,严格沿染色条带大小切下蛋白样品装入1.5mL EP管中,一般不要超过1cm2,不要切取没蛋白条带的多余胶。

      2、客户若只能提供IP洗脱液,则属于非常规项目要进行额外处理,需提供IP洗脱液成分的详细信息,项目周期延长1周。

      单蛋白修饰鉴定

      1、优先考虑客户提供考马斯亮蓝染色有明显条带的胶条样品,且单蛋白纯度为80%以上。

      2、单蛋白泛素化修饰鉴定,切取目的蛋白和目的蛋白以上至浓缩胶的全部分离胶作为样品;如是抗体纯化的单蛋白,则需将抗体重链和轻链去除。

      3、客户若只能提供IP洗脱液,则属于非常规项目要进行额外处理,项目周期延长1周,需提供IP洗脱液成分的详细信息和目的蛋白分子量,需提供WB验证后的蛋白实际分子量。

      iTRAQ/TMT/二甲基标记定量蛋白质组学

      1、最好送原始样本,除非客户有成熟的蛋白质组学的蛋白提取方法。

      2、动物组织样品:湿重不少于200mg,样品不能溶血,取材后用PBS冲洗3遍去除血液污染。

      3、植物组织样品:湿重不少于1g,取材后用PBS冲洗3遍去除杂质污染。

      4、菌体样品:原则上只接受常见无毒菌的菌体样品,菌体沉淀不少于100mg或者体积不少于100μL;若为含有毒菌的菌体样品或菌体裂解液,按照《病原微生物技术服务操作指南》执行。

      5、细胞样品:收集细胞沉淀,PBS冲洗3遍,送样量为5×106 或细胞沉淀不少于50μL。

      6、培养基上清液:需保证无菌体或细胞(用0.2μm膜过滤),有条件可浓缩后再寄送;送样体积不少于10ml。

      7、血清样品:新鲜血液取出后,4℃,2000g,离心15min,取上清,即得血清;血清制备过程中保证不能溶血;血清体积要求不少于500μl;制备血清过程中,客户可根据自己的样品和实验要求选择是否添加抗凝剂,一般不用添加。

      8、若客户直接提供蛋白,则蛋白量不少于1mg,浓度不低于2mg/mL。

      SILAC定量蛋白质组学

      1、客户提供的细胞系使用的培养基需符合公司现有SILAC培养基类型: 1640/DMEM/MEM;若非这三类培养基的细胞系,需提前查阅是市面是否有SILAC培养基。

      2、客户可自行提供细胞系:冻存细胞干冰环境寄送;状态良好的在养细胞,培养瓶中装满培养基,常温寄送。

      3、如客户自己培养的细胞:需做好标记效率检测,收集细胞沉淀,PBS冲洗3遍,送样量为5×106 或细胞沉淀不少于50μL。

      4、若客户直接提供蛋白,则蛋白量不少于1mg,浓度不低于2mg/mL。

      定性修饰组学

      1、最好送原始样本,除非客户有成熟的蛋白质组学的蛋白提取方法。

      2、动物组织样品:湿重不少于500mg,样品不能溶血,取材后用PBS冲洗3遍去除血液。

      3、植物组织样品:湿重不少于5g,取材后用PBS冲洗3遍去除杂质污染。

      4、菌体样品:原则上只接受常见无毒菌的菌体样品,菌体沉淀不少于1g或者体积不少于500μL;若为含有毒菌的菌体样品或菌体裂解液,按照《病原微生物技术服务操作指南》执行。

      5、细胞样品:收集细胞沉淀,PBS冲洗3遍,送样量为5×107 或细胞沉淀不少于500μL,磷酸化修饰定量送样量为2×107 或细胞沉淀不少于200μL。

      6、若客户直接提供蛋白,则蛋白量不少于20mg,组蛋白不少于1mg,尽量提供蛋白干粉,磷酸化修饰蛋白量为不少于10mg,浓度不低于2mg/mL。

      iTRAQ/TMT/二甲基标记修饰定量组学

      1、最好送原始样本,除非客户有成熟的蛋白质组学的蛋白提取方法。

      2、动物组织样品:湿重不少于500mg,样品不能溶血,取材后用PBS冲洗3遍去除血液。

      3、植物组织样品:湿重不少于2g,取材后用PBS冲洗3遍去除杂质污染。

      4、菌体样品:原则上只接受常见无毒菌的菌体样品,菌体沉淀不少于300mg或者体积不少于300μL;若为含有毒菌的菌体样品或菌体裂解液,按照《病原微生物技术服务操作指南》执行。

      5、细胞样品:收集细胞沉淀,PBS冲洗3遍,送样量为5×107 或细胞沉淀不少于500μL;磷酸化修饰定量送样量为2×107 或细胞沉淀不少于200μL。

      6、若客户直接提供蛋白,则蛋白量不少于5mg,组蛋白不少于1mg,尽量提供蛋白干粉,磷酸化修饰蛋白量为不少于3mg,浓度不低于2mg/mL。

      SILAC修饰定量组学

      1、客户提供的细胞系使用的培养基需符合公司现有SILAC培养基类型: 1640/DMEM/MEM;若非这三类培养基的细胞系,需提前查阅是市面是否有SILAC培养基。

      2、客户可自行提供细胞系:冻存细胞干冰环境寄送;状态良好的在养细胞,培养瓶中装满培养基,常温寄送。

      3、如客户自己培养的细胞:需做好标记效率检测,收集细胞沉淀,PBS冲洗3遍,送样量为5×107 或细胞沉淀不少于500μL,磷酸化修饰定量送样量为2×107 或细胞沉淀不少于200 μL。

      4、若客户直接提供蛋白,则蛋白量不少于10mg,组蛋白不少于1mg,尽量提供蛋白干粉,磷酸化修饰蛋白量为不少于5mg,浓度不低于2mg/mL。

      Label Free定量蛋白质组学

      1、最好送原始样本,除非客户有成熟的蛋白质组学的蛋白提取方法。

      2、动物组织样品:湿重不少于200mg,样品不能溶血,取材后用PBS冲洗3遍去除血液。

      3、植物组织样品:湿重不少于1g,取材后用PBS冲洗3遍去除杂质污染。

      4、菌体样品:原则上只接受常见无毒菌的菌体样品,菌体沉淀不少于100mg或者体积不少于100μL;若为含有毒菌的菌体样品或菌体裂解液,按照《病原微生物技术服务操作指南》执行。

      5、细胞样品:收集细胞沉淀,PBS冲洗3遍,送样量为5×106或细胞沉淀不少于50μL。

      6、培养基上清液:需保证无菌体或细胞(用0.2μm膜过滤),有条件的话可浓缩后再寄送;送样体积不少于10ml。

      7、血清样品:新鲜血液取出后,4℃,2000g,离心15min,取上清,即得血清;血清制备过程中保证不能溶血;血清体积要求不少于500μl;制备血清过程中,客户可根据自己的样品和实验要求选择是否添加抗凝剂,一般不用添加。

      8、若客户直接提供蛋白,则蛋白量不少于1mg,浓度不低于2mg/mL。

      Label Free修饰定量蛋白质组学

      1、动物组织样品:湿重不少于500mg,样品不能溶血,取材后用PBS冲洗3遍去除血液。

      2、植物组织样品:湿重不少于2g,取材后用PBS冲洗3遍去除杂质污染。

      3、菌体样品:原则上只接受常见无毒菌的菌体样品,菌体沉淀不少于300mg或者体积不少于300μL,若为含有毒菌的菌体样品或菌体裂解液,按照《病原微生物技术服务操作指南》执行。

      4、细胞样品:收集细胞沉淀,PBS冲洗3遍,送样量为3×107 或细胞沉淀不少于300μL;磷酸化修饰定量送样量为2×107 或细胞沉淀不少于200μL。

      5、若客户直接提供蛋白,则蛋白量不少于20mg,组蛋白不少于2mg,尽量提供蛋白干粉,磷酸化修饰蛋白量为不少于10mg,浓度不低于2mg/mL。

      N-糖基化定性和定量分析鉴定

      1、动物组织样品:湿重不少于500mg,样品不能溶血,取材后用PBS冲洗3遍去除血液。

      2、细胞样品:收集细胞沉淀,PBS冲洗3遍,送样量为5×107 或细胞沉淀不少于200μL。

      3、血清样品:新鲜血液取出后,4℃,2000g,离心15min,取上清,即得血清;血清制备过程中保证不能溶血;血清体积要求不少于500μl;制备血清过程中,客户可根据自己的样品和实验要求选择是否添加抗凝剂,一般不用添加。

      4、抗体药物:蛋白量不低于20μg,如需进行N-糖链分析则蛋白量不低于50μg,纯度大于80%,注明溶液成分。

      特殊说明:

      1、若样品中有毒性或腐蚀性的物质,必须事先声明。

      2、若样品是病原性微生物或病原微生物侵染的组织,按照《病原微生物技术服务操作指南》执行。

      3、若样品已经过处理,请注明处理的过程及使用的试剂。

      4、若样品材料具有特殊性请备注说明,如具有很厚的荚膜、容易氧化等等。

      5、若客户需要特殊的处理方法,请备注说明。

      6、若客户提取的蛋白,需提供SDS—PAGE图,检测蛋白提取效果。

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