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血清碱性磷酸酶(ALP)测定的常用方法有几种,它们之间有何差别?

        

正常成人血清ALP主要来自肝脏,而来自骨组织的ALP一般少于总活性一半。其各自含量与年龄密切相关,但也受性别的影响。还可能存在少量的小肠型ALP,特别是血型为分泌型B型或O型的人。现已知人体含4ALP同工酶,即肠型(IALP)、胎盘型(PALP)、生殖细胞型(GALP)和非特异组织型(TUALPALP。其中非特异组织型碱性磷酸酶在基因表达后经过不同的修饰形成肝、肾、骨等次级同工酶。

[临床意义]

肝胆疾病,尤其是阻塞性黄疸患者,该酶活性显著升高。骨骼疾病时血清ALP活性增高。血清ALP活性测定成为鉴别肝胆疾病和诊断骨质增生不可缺少的指标。

[测定原理]

在碱性条件下,碱性磷酸酶将无色磷酸对硝基苯酚水解为黄色对硝基苯酚,在405nm测定对硝基苯酚生成

的速率,这个速率与血清中ALP活性成正比。反应需要Mg2+作为激活剂。

[常用测定方法]

测定ALP活性受到组织来源、底物类型、反应温度,特别是缓冲液种类的影响,目前,国际上生化试剂主要生产厂家,生产的ALP检测试剂盒的主要差异就在于所使用的缓冲液不同。常用的激活型缓冲液不仅起缓冲作用,并可作为磷酸的受体参与反应,因而能增进酶促反应的速率。激活型缓冲液中,二乙醇胺(DEA)的激活作用比2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)的激活作用更强。因此用不同缓冲液测定的ALP活性,其参考值不同。

不少国家,包括我国,多采用AMPDEA做缓冲液,但这两类物质不易提纯,前者常混有5-氨基-3--2,

2,5-三甲基乙醇,后者易含一乙醇胺,均对ALP有抑制作用。故日本学者建议采用2-乙氨基乙醇缓冲液,而德国学者建议使用甲基葡萄糖胺缓冲液,此类试剂纯度高,不含抑制ALP活性的物质,可不加螯合剂,其pK值高于DEA。根据所使用的激活型缓冲液不同,目前常用的检测方法主要有四种:

1、 IFCC推荐方法:AMP2-氨基-2-甲基-1-丙醇)缓冲液

正常参考范围:45~130 U/L37

2、 JSCC推荐方法:EAE2-乙氨基乙醇)缓冲液

正常参考范围:115~359 U/L37

3、 GSCC推荐方法:DEA(二乙醇胺)缓冲液

正常参考范围:80~260 U/L37

4、 DSKG推荐方法(新GSCC方法):MEGN-甲基-D-葡萄糖胺)缓冲液

正常参考范围:45~130 U/L37


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