实验室用高效液相色谱仪种类及组成

　　实验室用高效液相色谱仪种类：

　　高效液相色谱仪种类

　　1、按功能可分：国产分析型高效液相色谱仪和国产制备型高效液相色谱仪。

　　2、按应用范围可分：国产专用型高效液相色谱仪和国产通用型高效液相色谱仪。

　　3、按分离规模可分：国产小型高效液相色谱仪和国产大型高效液相色谱仪。

　　4、按作用可分：国产定量分析高效液相色谱仪和国产定性分析高效液相色谱仪。

　　5、按固定相和流动相的极性大小可分：国产正相高效液相色谱仪和国产反相高效液相色谱仪。

　　6、按梯度数目可分：国产二元梯度高效液相色谱仪、国产三元梯度高效液相色谱仪和国产四元梯度高效液相色谱仪等。

　　高效液相色谱仪组成

　　一. 高压输液系统

　　贮液装置、高压输液泵、过滤器、脱气装置等

　　1.贮液器：贮液器用于存放溶剂。溶剂必须很纯，贮液器材料要耐腐蚀，对溶剂呈惰性。贮液器应配有溶剂过滤器，以防止活动相中的颗粒进进泵内。溶剂过滤器一般用耐腐蚀的镍合金制成，空隙大小一般为2mm。

　　2.脱气装置：脱气的目的是为了防止活动相从高压柱内流出时，开释出气泡进进检测器而使噪声剧增，甚至不能正常检测。

　　3.高压输液泵

　　高压输液泵是高效液相色谱仪的重要部件，是驱动溶剂和样品通过色谱柱和检测系统的高压源，其性能好坏直接影响分析结果的可靠性。

　　对高压泵的基本要求是：

　　①流量稳定；②输出压力高，最高输出压力为50Mpa；③流量范围宽，可在0.01～10ml／min范围任选。④耐酸、碱、缓冲液腐蚀。⑤压力波动小。

　　2.梯度洗脱装置置

　　梯洗脱是利用两种或两种以上的溶剂，按照一定时间程序连续或阶段地改变配比浓度，以达到改变活动相极性、离子强度或pH值，从而进步洗脱能力，改善分离的一种有效方法。当一个样品混合物的容量因子是范围很宽，用等度洗脱时间太长，且后出的峰形扁平不便检测时，用梯度洗脱可以改善峰形、并缩短分离时间。HPLC的梯度洗脱与GC的程序升温相似，可以缩短分析时间，进步分离效果。使所有的峰都处于最佳分离状态，而且峰形尖而窄。

　　二. 进样器

　　进样器一般要求密封性好，死体积小，重复性好，保证中心进样，进样时对色谱系统的压力和流量波动小，并便于实现自动化。

　　高压进样阀是目前广泛采用的一种方式。阀的种类很多，有六通阀、四通阀，双路阀等。以六通进样阀最为常用。

　　三.分离系统

　　色谱分离系统包括色谱柱、固定相和活动相。色谱柱是其核心部分，柱应具备耐高压、耐腐蚀、抗氧化、密封不漏液和柱内死体积小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱寿命长的要求。通常采用优质不锈钢管制成。

　　色谱柱按内径不同可分为常规柱、快速柱和微量柱三类。

　　常规分析柱柱长一般为10~25cm，内径4 ~ 5mm，固定相颗粒直径为 5、~ 10、mm。为了保护分析柱不受污染，一般在分析柱前加一短柱，约数厘米长，称为保护柱。

　　（微量分析柱内径小于l mm，凝胶色谱往内径3～12 mm，制备往内径较大，可达25 mm以上。）

　　四. 检测系统

　　检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。

　　1.紫外可见吸收检测器（ultraviolet－visible detector，UVD）

　　紫外可见吸收检测器（UVD）是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有活动地的紫外可见光度计。

　　（1）紫外吸收检测器：

　　紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽（190nm～800nm）。它有两个流通池，一个作参比，一个作丈量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。当组分进进丈量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。

　　局限：活动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做

　　活，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。

　　（2）光电二极管阵列检测器（photodiode array detector，P）：

　　也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再进射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保存时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据，从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。