高效液相色谱仪及在水质分析中的应用

　　（一）概述

　　高效液相色谱法（HPLC）又称高压液相色谱法，是60年代末70年代初发展起来的快速分离分析方法。其基本流程与气相色谱法相似，只是以高压输液系统代替气相色谱的气路系统。高效液相法只要求样品能制成溶液而不需要气化，因此不受样品挥发性和热稳定性限制。能用高效液相进行分析的物质占有机物总量的75－80％。因高效液相具有适用范围广、分高效率高、速度快、灵敏度高、流动相可选择范围宽、色谱柱可反复应用、流出组分容易收集、安全及操作自动化程度高等特点而较广泛应用于各种分析领域，也是环境和卫生检测常用的极其重要的分析手段。

　　（二）基本原理

　　高效液相色谱法与经典柱色谱法的原理相同。溶质在固定相和流动相之间进行连续多次的交换过程，由于每种物质在两相间的分配系数、亲合力、吸附能力、离子交换或分子大小不同引起的排阻作用等的差别而得到分离。气相色谱中引入的一些基本概念和理论，结合液相色谱的实际，稍加改变仍可使用。

　　（三）高效液相色谱法分类

　　根据分离机理，高效液相可分为液一液分配色谱法、液一固吸附色谱法、离子交换色谱法和空间排阻色谱法四类。

　　（l）液．液分配色谱法

　　液一液分配色谱法是根据各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异进行分离的。早期所用的固定相是将固定液涂渍在惰性担体上，固定液容易流失。现时的固定相一般采用键合固定相，即用化学反应的方法将固定液的官能团结合到担体上，克服了固定相易流失和污染分离组分的缺点，从而得到了广泛应用，所以现时液一液分配色谱又称化学键合相色谱。它又可分为极性键合相色谱和非极性键合相色谱。极性键合相色谱又称正相色谱，其固定相表面键合了极性有机基团如氰基、氨基、双羟基等，流动相多用非极性或弱极性溶剂，适于分离极性化合物。非极性键合相色谱又称反相色谱，其固定相表面都是极性很小的烃基如十八烷基、辛烷基、甲基、苯基等，而流动相则大多采用强极性的溶剂（如水、甲醇等）或无机盐的缓冲溶液。反相色谱不仅适合于分离非极性物质，而且具有通用型液相色谱的特点，分析对象几乎遍及各种类型的化合物，在化学键合相色谱中绝大部分属于这种类型。

　　（2）液一固吸附色谱法

　　液一固吸附色谱法是根据各组分在吸附剂（固定相）上吸附能力的差异进行分离的。所用的固定相多是具有吸附活性的吸附剂，常用的有硅胶、高分子多孔小球以及氧化铝、分子筛、聚酰胺等。液固吸附色谱的分离对象主要是具有中等分子量的低挥发性化合物，非极性或中等极性的、非离子型的油溶性样品。

　　液固色谱的应用受到如下限制：①难于获得具有良好重现性的吸附剂；②吸附剂由于不可逆吸附或催化作用，会使样品损失或变性；③吸附剂由于可逆吸附使含水量变化或减活等，造成不稳定的柱效。

　　（3）离子交换色谱法

　　离子交换色谱以离子交换树脂为固定相，树脂上具有固定离子基团和可交换的离子基团，试样中的电离组分与树脂上的可交换离子基团进行可逆交换，根据电离组分对树脂上的固定离子基团的亲合力不同而得到分离。离子交换树脂可分为阴离子及阳离子交换树脂。阴离子交换树脂又分为强碱及弱碱性树脂；阳离子交换树脂又分为强酸及弱酸性树脂。由于强碱或强酸性离子交换树脂比较稳定，因此在高效液相色谱中应用较多，可用于分离测定离子型化合物，如有机酸、碱、盐类和金属离子混合物等。

　　（4）空间排阻色谱法

　　空间排阻色谱又称分子排阻色谱，凝胶色谱等，它是按照溶质分子大小顺序分离混合组分的。所用的固定相是化学惰性多孔物质，被分离的混合物随流动相通过固定相时，分子大的组分不发生渗透作用，沿凝胶颗粒间隙流动，流程短，流速快；而分子小的的组分则渗入凝胶颗粒的孔隙中，流程长，流速慢；因此不同大小的分子流出色谱柱的时间不同从而得到分离。这种色谱可以分离分子量 100至8 ×105的任何类型的化合物，只要能溶于流动相即可。

　　（四）高效液相色谱仪

　　高效液相色谱仪一般由高压输液系统。进样系统。色谱分离系统、检测器、记录器或数据处理机等组成。流程为流动相由高压输液泵输送，样品由进样装置送人，流动相将样品带入色谱柱进行分离，分离后的各组分依次进入检测器，检测器输出的信号经记录器记录或经数据处理机记录处理。

　　（l）高压输液系统

　　高压输液系统包括储液器、过滤器、梯度洗脱装置和高压泵。储液器用来存放洗脱液，由不锈钢或玻璃制成。洗脱液在使用之前需除去所溶解的气体，以免在流人检测池时由于压力降低形成气泡，影响检测器正常工作。常用的脱气方法有超声波脱气、吹氦脱气和减压脱气。过滤器安装在泵人口和储液器之间用来滤去洗脱液中的固体微粒以防止对泵系统和密封圈的堵塞和污染。梯度洗脱可分为低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。低压洗脱装置是在常压下将不同极性的溶剂按预先设定的比例在泵前混合后，再由高压泵输人色谱柱，仅需一台泵，重复性好，精密度高；高压梯度装置是用两台或三台高压泵分别将两种或三种不同极性的溶剂输人混合器，经充分混合后输人色谱柱。应用梯度洗脱可提高分离度，改善色谱峰形，提高分析精度。高压泵是高效液相仪器中最重要的部件之一，泵的性能好坏直接影响整个仪器和分析结果的可靠性。对泵的性能应有以下要求：①输出压力高：为完成高效快速分离，希望泵能提供150－300kg/cm2的压力，最高输出压力应为500kg/cm2左右；②流量范围广：对于分析型仪器，输出流量一般在0．1－10mL/min范围内连续可调；③流量稳定：泵的输出流量恒定，无脉冲，流量精度和重复性为0．5％左右，以使对液体流速敏感的检测器能稳定地工作，使色谱定性、定量分析具有良好的重现性；④耐腐蚀：要适用于各种有机溶剂、水和缓冲溶液；⑤其它：密封性能好，泵室体积小，便于清洗，便于实现梯度洗脱功能，能连续不断供液，维修简便等。目前，应用于高效液相色谱仪中的高压泵有恒流泵和恒压泵两类。恒流泵可提供无脉冲、流量恒定的流动相，如果色谱柱阻力和流动相粘度等外界条件有变化，只引起柱压变化，流量保持不变。注射式螺杆泵、往复式柱塞泵与往复式隔膜泵均属此类。恒压泵可提供无脉冲、压力不变的流动相，而流量随外界阻力变化而改变。如果系统的阻力不发生变化，恒压泵就能提供恒定的流量，气动放大泵属于此类。

　　（2）进样系统

　　进样系统是将待测样送入色谱柱的装置。对于进样装置—般要求密封住好、死体积小、重现性好，保证中心进样，进样时对色谱系统的的压力和流量波动小，并便于实现自动化。高效液相色谱仪常用的进样装置主要有注射器进样装置和阀进样装置两类。①注射器进样：这种进样装置同气相色谱的进样相似，即将微量注射器的针尖穿过进样口的弹性隔膜，将样品压人柱头。这种方法获得的柱效比其它任何进样方式都高，但仅适用于100kg/cm2以下的低压系统，进样重复性差，隔膜被针刺过的部分容易泄漏。在向较高压力的分离系统进样时，可采取停流进样，即先停止高压输液，用注射器在常压下进样，然后再恢复系统压力。由于液体扩散系数小、，停流进样的柱效与常压进样不相上下。只是停流进样无法取得精确的保留时间，峰形的重现性也不好；②阀进样：这种进样装置通常为带有定量管的六通进样阀，优点是可在高压下进样而无需停流，进样量可变范围大，进样由固定体积的定量管或微量注射器控制，重复性好，易于自动化。缺点是阀的死体积大，容易引起色谱峰展宽，柱效较注射器进样下降约10％。

　　（3）色谱分离系统

　　高效液相色谱仪最基本的任务是从事分离，所以分离系统是核心。这个系统包括固定相、流动相和色谱柱，色谱的分离效率和分离能力取决于这三者的精心设计和配合。

　　第一，固定相又称柱填料，它的特性决定色谱柱的性能。填料的热力学性质影响色谱柱的选择性，决定色谱柱是否适合于所给定的分离。填料的动力学性质或填料的结构特点，如颗粒的大小、形状、均匀性、表面积、孔径、孔体积等，影响色谱柱的效率。高效液相色谱的发展，主要是由于柱填料的发展而发展起来的。与经典液相色谱相比，高效液相色谱采用的固定相的粒度减小（5－10μm），粒度分布均匀（RSD＜5％），有利于传质过程和扩散过程的加速，从而大大提高了柱效。常用的填料有表面多孔型（薄壳型）和全多孔微粒型。表面多孔型填料是在一个惰性的硬核（如实心的玻璃球）表面包覆一层很薄的多孔物质，如硅胶、氧化铝、聚酰胺、离子交换树脂等，也可制成化学健合填料。一般为规则的球形，机械强度较好，能承受高压，柱填充比较均匀、紧密，渗透性好，传质速度快。由于该填料比表面积小，容量低，所以进样量要小，要求检测器应很灵敏。全多孔微粒型填料有球形和无定形两种，有较大的比表面积和孔体积，所以柱容量比较大，检测灵敏度较高。由于填料粒径小，微孔深度小，固定相的质量传递和滞流流动相的质量传递大大改善，柱效提高，但柱的渗透性不如表面多孔型填料。

　　第二，流动相在气相色谱中，只是运载样品组分通过色谱柱后进人检测器，而对色谱分离几乎没有影响，故气相色谱主要通过改变固定相和柱温来改善分离效果；而液相色谱的流动相，除了运载样品组分通过色谱柱和进人检测器外，还参与和影响色谱分离过程，有时甚至起主要作用，所以在液相色谱中可通过改变固定相和流动相组成两者来改善分离效果。一般情况下，选择流动相要考虑以下方面：①能溶解样品，但不与样品发生化学反应；②与固定液不互溶，不发生不可逆作用，不引起柱效能和保留特性的变化，不妨碍柱的稳定性；③粘度要小，以避免样品中各组分在流动相中扩散及传质速度下降，降低柱效能，增大柱压。但粘度太小，在流路中会形成气泡，增加仪器的噪声；④应与所用的检测器相适应，用紫外检测器时，流动相应在所使用的波长下没有吸收或吸收很小；用荧光检测器时，溶剂中不能含有发生荧光的物质；用示差折光检测器时，选用的溶剂应与待测组分的折光率有较大的差别，以提高灵敏度；⑤要保证一定的纯度，以免杂质在柱中累积影响柱效能，增加噪声。完全符合以上要求的溶剂是没有的，实际工作中溶剂选择的主要依据还是相对极性大小，兼顾其它物理化学性质。另外，高效液相色谱所用的流动相，均需经过纯化、脱气等处理，以保证柱和检测器性能良好及延长它们的使用寿命。

　　高效液相色谱柱按几何特性可分为常规柱、快速柱和微量色谱柱，后者又分为细管径柱、填充毛细管柱和开管柱。近年来，快速柱和微量色谱柱的开发已逐渐引起人们重视。由于柱填充技术的完善和3μm填料的出现，快速柱仅用3－5cm的柱长，就能获得4000－5000个理论塔板数，能显著地缩短分析时间和节省大量溶剂。细管径色谱柱由于分辨率高、检测灵敏度高、溶剂消耗少及便于联用技术的实现，具有美好的应用前景。

　　第三，色谱柱一般采用优质不锈钢制成，内壁经精细抛光处理以避免管壁效应。微量色谱柱可采用弹性石英管或聚四氟乙烯材料制作。色谱柱的长度根据填料颗粒的大小来确定，对于常用的5－10μm填料，柱长一般为10－30cm，多数商品预装柱为25cm，凝胶柱比较长。加大柱长将延长分析时间，增加柱压，所以，在分离度符合要求的情况下，应尽量使用短柱。使用短柱，柱外峰扩展成为影响柱效的重要因素，因此，常规分析柱的柱长不要小于10cm。柱内径明显地影响柱效，这主要是因为柱内的分子径向扩散和管壁效应引起的。如果柱内径不够大，则分子在流出柱子之前将扩散到管壁区，管壁区的填充不如柱中心区均匀，流动相流速将会改变，使峰展宽。一般用于分析的色谱柱，内径为2－5mm。随着柱填充技术的发展，内径为2mm的色谱柱逐渐受到重视，因为在相同的分析时间内，流量随柱半径的平方而减小，2mm内径色谱柱的溶剂流量仅为5mm内径色谱柱的六分之一，不过，由于柱内体积减小，柱外效应就显得更为重要。

　　色谱柱性能的优劣还与柱两端的柱接头结构有关。柱接头包括液流分布器和滤片，液流分布器可防止液流产生湍流或涡流，柱下端的滤片可防止柱填料进人检测器或堵塞管道，柱上端的滤片可防止填料倒出，又可保护柱床层在进样时不被破坏。柱接头的死体积应尽可能小，以减小柱外峰扩展。若样品中含有强保留组分，在连续多次进样后，柱效将降低，保留值和柱选择性会发生变化。为了保护分离柱不被污染以延长柱的使用寿命，常在分离柱前加接保护柱。保护柱比较短，内装与分离柱类似的较粗颗粒的表面多孔填料。采用保护柱，会引起区带扩张，使分离效率降低。

　　（4）检测器

　　检测器是高效液相色谱仪的三大关键部件之一。它的作用是连续地将色谱柱中流出的样品组分含量随时间的变化，转变成易于测量的电信号，以便在记录设备上记录下来。检测器按其应用范围分为通用型检测器和专用型（选择性）检测器两大类。通用型检测器测量的是任何液体都存在的物理量，所以适用范围很广。但是由于它对溶剂本身有响应，因此易受温度变化、流量波动等因素的影响，造成较大的噪音和漂移，灵敏度低，不适用于痕量分析，并且不能用于梯度洗脱。专用型检测器是测量被分离组分的某一特性变化的检测器，因为它仅对某些被测定的物质响应灵敏，对流动相的响应很小或没有响应，所以检测灵敏度高，受外界影响小，并且可用于梯度洗脱操作。但是由于它只对某些物质响应，限制了其应用范围。

　　根据实际分析的需要，高效液相色谱仪可配备数十种检测器，但常用的主要有下列几种：

　　①紫外吸收检测器。这种检测器是高效液相色谱仪中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的色谱仪都配有这种检测器。它适用于在紫外区有吸收的化合物的测定，是一种灵敏度和检测精度都较高的选择性浓度型检测器。

　　按光路系统来分，紫外吸收检测器有单光路和双光路两种。单光路系统直接测量样品通过检测池时由于对紫外光的吸收而引起的接收元件输出信号的变化，从而测定样品的浓度。由于单光路系统光路无补偿，故对外界因素的变化较敏感。双光路系统利用两个接收元件分别接收来自样品池和参比池的光束，以光强差为输出信号来测定样品的浓度，从而提高了检测器的稳定性。

　　按波长来分，紫外吸收检测器有固定波长（单波长和多波长）和可变波长（紫外分光和紫外可见分光）两类。紫外－254检测器是一种常用的单波长检测器，采用低压汞灯为光源，结构简单，使用方便。有紫外吸收的化合物，往往在254nm都有一定吸收，虽然254nm不一定是它们的最大吸收波长。由于这种检测器的灵敏度相当高，对许多有紫外吸收的化合物都能进行检测。多波长式检测器采用氖灯、氢灯或中压汞灯为光源，可用滤光片来选择所需的工作波长，如 254，280，313和 365nm等。可变波长检测器是装有流动池的紫外分光光度计和紫外可见分光光度计。紫外可见分光式检测器的工作波长范围宽，且可自由选择，所以接近于通用型检测器，但由于分光后的单色光较弱，其灵敏度比固定波长检测器低。使用紫外吸收检测器时，溶剂不应吸收测定波长的紫外光，样品测定波长应当在溶剂紫外吸收波长上限以上，才能保证检测灵敏度。溶剂含有吸收紫外光的杂质，会使检测背景提高，灵敏度降低，采用梯度洗脱时，会引起严重漂移。

　　②荧光检测器：荧光检测器是一种高灵敏度选择性检测器，用来检测可发生荧光的化合物。某些化合物可通过化学衍生技术生成荧光衍生物，再进行荧光检测。荧光检测器的最大优点是有极高的灵敏度，一般来说，它比紫外吸收检测器的灵敏度高10－1000倍，但其线性范围不如紫外检测器宽。当样品浓度较高时，由于内滤效应和荧光猝灭效应，荧光强度不再与浓度呈线性关系，因此，在进行荧光检测时，试样浓度要低于lmg/L，并且使用不含荧光物质的溶剂和标样。

　　③二极管阵列检测器。这是最新发展的光吸收式检测器，又叫快速扫描紫外／可见分光检测器。它采用光电二极管阵列检测元件，可在11－700urn间快速随峰扫描，获得三维色谱光谱流出曲线，提供关于色谱分离、定性定量的丰富信息。其主要特点是：可同时得到多个波长的色谱图，因此可以计算不同波长的相对吸收；可在色谱分离期间，对每个色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图。通过比较每个色谱峰的峰前沿、峰顶点、峰后沿三个位置的光谱图，可以判别色谱峰的纯度和分离情况；在色谱运行期间可以逐点进行光谱扫描，得到以时间一波长一吸收值为座标的三维色谱光谱图。由于每个组分都有全波段的光谱吸收图，因此，可利用色谱保留值及光谱吸收特征综合进行定性分析。

　　④示差折光检测器。示差折光检测器又称折射指数检测器，是一种通用型检测器。它是根据流动相中出现待测组分时折射率发生变化而设计的，通过连续测量色谱柱流出物折射率的变化来测定样品浓度。这种检测器的最大优点即是它的通用性，凡与流动相折射率不同的组分均可使用这种检测器。缺点是灵敏度不高，一般仅适用于例行分析，不能用于痕量分析，不能作梯度淋洗，而且对温度十分敏感。

　　⑤电化学检测器。电化学检测器可以选择性地检测具有电活性和经衍生后具有电活性的物质。灵敏度高，最低检测质量一般为ng水平，有时可达pg水平；选择性好，可测定大量非电活性物质中极痕量的电活性物质；线性范围宽，一般为4－5个数量级。目前电化学检测器主要有极谱、安培、库仑和电导四种。前三种可统称为伏安检测器，以测量电解电流的大小为基础，电导检测器则以测量电阻变化为根据。伏安检测器的工作原理是当电活性物质经过电极表面时，若电极材料和溶液之间存在电位差，则在电极表面产生电极反应，形成电流，经微电流放大器放大后记录下来，得到色谱图。电导检测器可直接检测柱后流出物的电导变化，从而计算出物质的含量。

　　（四）高效液相色谱法在水质分析中的应用

　　（1）水中多环芳烃的检测

　　多环芳烃是数量最多、分布最广的一类环境致癌物，在已发现的1000多种致癌物中，多环芳烃及其衍生物占三分之一以上，所以，环境样品中多环芳烃的含量常被作为环境污染评价的重要指标之一。由于多环芳烃类化合物不易被气化，而在紫外或荧光检测器上又有灵敏的特征的响应，消除或减少了那些无紫外吸收或无荧光信号化合物的干扰，并且可在反相色谱柱中的到很好的分离，因此，高效液相色谱法被列为首选的分析方法。通常测定饮用水、地下水和江、河、湖水中的多环芳烃，采用二氯甲烷或环己烷进行萃取，将萃取液通过佛罗里硅土或硅胶色谱柱预分离，浓缩后注人十八烷基硅烷（ODS）高效液相色谱技，用甲醇．水或乙睛，水为流动相，分离其中的各种多环芳烃，用荧光或紫外分光光度检测器检测。也可以将水样通过高分子多孔材料如 AmberliteXAD－ 2、XAD－ 4、GDX等富集，再用适当的溶剂洗脱，浓缩后注人高效液相色谱进行分析。美国环保局的6440法采用Thk甲烷萃取水中的16种多环芳烃，萃取液经干燥浓缩后，注人反相HC－ ODS Sil－ X色谱柱，用乙睛．水为流动相进行梯度洗脱，用紫外检测器和荧光检测器鉴别测定。

　　（2）水中农药的分离分析

　　有机氯农药（林丹、DDT、Dieldrin等）一般经液液萃取后用气相色谱一电子捕获检测器测定。这些有机氯农药毒性大、在环境中存在时间长，正被特异性更高、更易降解的有机磷农药和有机氮农药取代。在环境中易降解的化合物往往热稳定性差，易在柱上降解。在这种情况下，操作条件温和的高效液相色谱可有效地发挥其作用。例如，氨基甲酸酯农药是一类应用范围宽，药效高，而对哺乳动物毒性低的农药，随着大量生产和应用，对水环境造成了污染。由于它们热稳定性差，不适于用气相色谱法测定，Anderson等在测定河水中的氨基甲酸酯时，先将样品经过填有反相 C18薄壳型填料的预柱，再进人Altex Ultrasil－ ODS分析柱，以磷酸一乙酸缓冲溶液和甲醇的混合液为流动相，用高灵敏度的电化学检测器测定，对灭害威、多菌灵等氨基甲酸酯的最低检测质量可达50－430pg。

　　（3）水中酚类化合物的分析

　　酚类化合物属有毒有机污染物，取代程度越高，毒性越大。水源水中痕量的酚类化合物在氯化处理时形成氯酚会使饮水出现异味。美国环保局的

　　129种优先监测污染物中有有

　　1种是酚类化合物。我国水中优先控制污染物黑名单中列出的68种有毒污染物中有6种为酚类化合物。不同于气相色谱，高效液相色谱测定酚类化合物可以保持酚类化合物的组成不变，一般无需衍生而可直接测定，对不同取代和不同结构的酚可同时分离分析且重现性好、灵敏度高、选择性好。测定水中的酚类化合物，通常先将水样酸化至pH＜ 4，然后经二氯甲烷、氯仿、乙醇等溶剂萃取或通过AmberliteXAD－2、XAD－4、GDX－502、上试401和上试402等高分子多孔树脂进行富集，再用乙醇等溶剂洗脱，浓缩后注人反相色谱柱，用甲醇．水．乙酸为流动相进行梯度洗脱，用紫外检测器或二极管阵列检测器测定。

　　（4）水中硝基化合物的分析

　　带硝基的有机化合物是制造军火的主要原料，也是炸药爆炸的主要残留物之一，军火的生产和施工用引起的硝基化合物对水环境的污染日益受到关注。虽然气相色谱法常用的各类选择性检测器对硝基化合物的检测选择性好，灵敏度高，但由于这类化合物的热不稳定性给定量测定带来困难，因此常用液相色谱法检测。Maskarinec等用高效液相色谱法测定了水中硝胺类、硝基苯类和硝酸酯类炸药。首先用Porapak树脂吸附富集水中痕量的硝基化合物，然后用丙酮洗脱，浓缩后用乙酸钠一氯乙酸缓冲溶液和丙酮的混合液为流动相，用ZorbaxODS色谱柱分离，用灵敏的电化学检测器定量测定，硝化甘油（NG）和季戊炸药（PETN）的最低检测质量可达0．1－0．4ng。Jenkins等用反相高效液相色谱系统和紫外检测器，检测军工厂排放废水中的2，4－DNT、TNT、黑索今、旋风炸药（RDX）及环四甲撑四硝胺（HMX）。水样先用等体积的有机溶剂（甲醇十乙睛=76＋24）稀释，经0．4μm膜过滤，然后进人色谱系统进行分析。色谱柱为 为

　　Selco LC－8，流动相为水十甲醇十乙睛= =

　　58＋12，检测波长为 254urn。进样 100μL，HMX、RDX、TNT及 2，4－DNT的最低检测质量浓度分别为26，22，14，10μg/L。

　　（5）水样中无机物的分析

　　虽然高效液相色谱法主要针对有机物的分析，但也成功地用于无机物的分析。最常用的即为使用离子色谱分析阴离子和阳离子。一般使用电导检测器，如硫酸盐、硝酸盐和氯化物的分析。使用电导检测器最低检测质量浓度为几百μg/L，使用电化学检测器最低检测质量浓度则可低达几个μg/L。与传统的分析方法相比，离子色谱法一次分析可同时测定多种阴离子或阳离子，分析的灵敏度高，所用的样品量小。如果应用富集柱，可将大量水样富集从而可达到很低的检测质量浓度。使用磷酸盐缓冲液为流动相，采用反相高效液相色谱法紫外检测环境水样中的硝酸盐，最低检测质量浓度可达0．7μg/L。一些金属离子可与有机试剂形成螫合物，经反相高效液相色谱法分离后可用分光光度检测器同时测定。另外，水样中的砷和硒可用高效液相色谱与交流等离子检测器和柱后氢化物发生器联用技术进行分离检测。高效液相色谱与光解器、氢化物发生器及原子吸收火焰光度计联用系统分析自然界中的硒效果良好。