垂直电泳槽使用方法

　　垂直电泳槽使用方法：

　　一、垂直电泳槽组成部件

　　（一）装有铂金丝的贮液槽一对，配有冷却装置及电泳缓冲液流出口。

　　（二）凹型橡胶框，配有玻璃板，可分别制作厚度为lmm、

　　1.5mm的凝胶板，操作时根据需要选择适当厚度的玻璃板及梳子配套使用。

　　（三）样品孔模具（梳子）用于电泳加样。

　　（四）固定贮液槽的螺丝杆及螺母4对，28D、30型为5对。

　　（五）橡胶管五根。两根长的用于连接冷却水的出入口；中等长度的两根用于连接电极缓；中液的流出口；zui短的一根用于连接贮液槽间的冷却水。

　　（六）导线1付。

　　二、垂直电泳槽使用方法

　　（一）垂直电泳槽清洗部件

　　上述部件组装前要彻底清洗干净。尤其是玻璃板及凹形带槽橡胶框，必须用泡沫海绵沾少许肥皂粉或洗涤剂彻底清洗干净。清洗后的玻璃板应放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。

　　（二）组装电泳槽

　　A、

　　1、将四只固定螺杆插进一只贮液框（半上槽）的相应孔洞中，然后将贮液框仰放在桌上。

　　2、左手拿凹型槽橡胶模框，右手的拇指与中指握住玻璃板的两侧边缘插到橡胶模框内 （注意手指不能接触灌胶面的玻璃板）。

　　3、将带有玻璃的橡胶模框子放在仰放的贮液槽框架上，其下缘必须对齐贮液槽框下缘。

　　4、双手拿另一只贮液槽框与仰放在桌上的贮液槽框相合，并使橡胶框上的凸出线位于贮液槽有机玻璃框中央。

　　5、装上四只螺母，拧紧螺丝。注意拧紧螺丝时用力应均匀，zui好用双手按斜角位置双双逐渐拧紧。

　　6、将电泳槽垂直竖起，放在桌上，带短玻璃板的贮液槽称上槽（阴极端），带长玻璃板的贮液槽称为下槽（阳极端），在长玻璃板与橡胶框间有一缝隙。此缝隙可用已熔化的10％琼脂沿长玻璃板下端灌入，为防止留存气泡，可稍抬起一端即可赶去气泡。待琼脂完全凝固后才能灌胶。

　　B、也可将槽垂直竖起，将带有玻璃的橡胶模框直接放入槽中，对称拧紧螺丝后，用琼脂封底边。

　　（三）灌胶

　　1、先灌分离胶，待凝固后再灌浓缩胶。灌胶前接通冷却水，夹紧连接上下贮液槽的两根橡胶管。

　　2、用细头滴管吸取胶液，沿长、短玻璃板中间缝隙从一端加入胶液。为防止产生气泡，可稍拾起另一端（气泡往高处走），不断加入胶液。若单层胶（分离胶）则加胶量约距离短玻璃板上端0.3厘米处，轻轻加少许水，双手轻轻将梳子插入，待胶凝后就可形成凹形加样孔。

　　3、为防止漏胶，在上、下贮液槽中立即加入蒸馏水，但蒸馏水不能超过短玻璃板上缘。

　　4、胶凝固后即可看到样品槽梳子与凝胶板间有一层折

　　射率不同的亮区。

　　（四）加样

　　1、松开连接上、下贮液槽两根橡皮管上的夹子，放掉槽内的蒸馏水，待水流完后，再夹紧夹子。

　　2、双手轻轻取出样品梳子，即可看到界线清楚的加样孔，将孔中水分吸去（注意千万不要碰坏孔沿的字面）。

　　3、在上、下贮液槽中加入缓；中液，液体高度应超过上贮液槽短玻璃板上缘。

　　4、用微量注射器吸取一定量的样品加到长、短玻璃板间的凹型凝胶样品孔内（注意加样动作要轻，针头不能碰坏胶面）。

　　（五）电泳

　　一贮液槽导线与电泳仪的负极相连，下贮液槽导线与电泳仪的正极相连。检查线路无误，方可按照所要求的电压电流进行电泳。

　　（六）取出胶板

　　电泳结束，旋松螺母，取出胶框，剥出玻璃板，在两块玻璃板下角空隙内，用刀片背面轻轻撬动，即可将胶面与一块玻璃板分开，将有胶板的玻璃板平放在桌上，双手轻轻沿凝胶底将胶片托起，放在大培养皿中染色，胶板经漂洗、脱色后即可看到清晰的分离条带。