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  • 毛细管电泳仪的使用操作要点

    文/ 发布于2018-12-25 浏览次数:864

      毛细管电泳仪的使用操作要点

      1.将毛细管电泳仪放置于有空调的房间,保持室温恒定。同时,操作中控制毛细管及仪器恒温。

      2.缓冲液加压一段时间后,淌度和电渗流会变化,要经常更换。

      3.缓冲液要用0.45mm微孔滤膜过滤后使用。

      4.对未涂渍的毛细管柱每天使用前先用0.1mol/L氢氧化钠溶液、水及运行缓冲液各冲洗10min平衡后使用。更换缓冲液时,要用水冲洗3min后,再用缓冲液冲洗10min平衡后进样。

      5.样品宜溶于稀释5~10倍的运行缓冲液中,以获得好的峰形。

      6.为提高定量准确性,宜加入一内标。在保证峰形的前提下,样品宜用高浓度,进样时间应大于5psi×sec。

      7.摸索实验条件时,可先用一短柱,用磷酸盐、硼砂或Tris在不同的pH值条件下试验,当选定缓冲液种类时,可先改变pH值获得最佳分离,再改变浓度以获得较好的峰形及柱效。为使分析高效、快速,电压一般可用18~20kv。

      8.每次作完实验后,用水冲洗5min,可将毛细管两端置于水中保存,也可用氮气吹干后保存。

      电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类,自由界面电泳不需支持物,如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等,分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳。

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