预吸附二抗是同时使用多种一抗及其相应的二抗进行多色实验的理想选择。预吸附处理可降低二抗与细胞和组织样品中的内源性免疫球蛋白发生交叉反应的风险。
预吸附（又称交叉吸附）是为提高抗体特异性而引入的额外步骤，具体方法是利用具有潜在交叉反应性的物种（本例中为绵羊和牛的轻链）制备固定血清蛋白，然后使二抗混合物（例如含有抗兔 IgG 轻链、抗绵羊 IgG 轻链和抗牛 IgG 轻链的二抗）通过含有这种固定血清蛋白的基质。
只有特异于兔 IgG 轻链的抗体能够通过柱子，而与绵羊或牛 IgG 轻链发生交叉反应的抗体将结合并吸附到基质中，从而得到可特异性地识别兔 IgG 轻链的二抗。
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